kv1.5基因敲低對(duì)人乳腺上皮細(xì)胞增殖及akt信號(hào)通路的影響

1、遼寧師范大學(xué)碩士學(xué)位論文Kv1.5基因敲低對(duì)人乳腺上皮細(xì)胞增殖及Akt信號(hào)通路的影響姓名：陳茜申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師：鄒偉2012-06K v l ．5 基因敲低對(duì)人乳腺上皮細(xì)胞增殖及A k t 信號(hào)通路的影響E f f e c t so f K v 1 ．5g e n e k n o c k - d o w n o n p r o l i f e r a t i o nm e d i a t e d b y A k

2、 ts i g n a l i n g p a t h w a y i nh u m a n m a m m a r y e p i t h e l i u m c e l l sM C F 10 AA b s t r a c tK 十c h a n n e li st h em o s ta b u n d a n t a n d w i d e l y d i s t r i b u t e di o nc h a n n e l

3、．I t p l a y s a m a j o rr o l ei nt h es i g n a lt r a n s d u c t i o np a t h w a y o f e x c i t a b l ec e l l sa n d u n e x c i t a b l ec e l l sa n d i n v o l v e di nc e l lp r o l i f e r a t i o n a n dd i

4、 f f e r e n t i a t i o ne t c ．K v l ．5 c h a n n e l ( a l s on a m e dK C N A 5 ) i se n c o d e db yK C N A 5 g e n e ，w h i c hb e l o n g st ot h ef a m i l yo f v o l t a g e - g a t e di o nc h a n n e l ．S i n

5、c e 19 9 0 ，i th a sb e e n c l o n e d f r o m r a tb r a i n f o rt h e f i r s tt i m e ，K V l ．5w a s f o u n d i nm a n y t i s s u e si n c l u d i n g b r a i n ，h e a r t ，l i v e r ，k i d n e ya n ds o m eo ft h

6、 e i rm a l i g n a n tc o u n t e r p a r t s ．M a n yr e p o r t si n d i c a t e dt h a tI o 1 ．5 i sc o r r e l a t e dc l o s e l y t ot h e g e n e r a t i o na n d d e v e l o p m e n to f b r e a s tc a n c e r ．

7、T h u s ，r e s e a r c ho nK v l ．5m e c h a n i s mi nc e l l p r o l i f e r a t i o na n df u r t h e ri n v e s t i g a t i o no fK v l ．5 a st h e r a p e u t i ct a r g e ti si m p o r t a n t t oc l i n i c a lp r

8、 e v e n t i o n a n d t r e a t m e n to f b r e a s t c a n c e r ．S t u d i e sh a v es h o w n 也a tK v l ．5 c h a n n e l s w a sa s s o c i a t e dw i t hC a v e o l i n 一1 ( C a v 一1 ) i nm u l t i p l ec e l lt y

9、p e s ．O u rp r e v i o u s w o r k s h o w e dt h a tt h ee x p r e s s i o no fK v l 。5 a n dC a v - 1 i nM C F - 7 c e l l sw e r es i g n i f i c a n t l yl o w e rt h a n t h a to fM C F IO A c e l l s ．1 1 1 er e s

10、 u l t ss u g g e s t e dt h a tK v 1 ．5 c h a n n e l sm a y b ei n v o l v e di nb r e a s tc e l lp r o l i f e r a t i o na n d C a v ．1m a y b ea l s oi n v o l v e d ．I nt h i ss t u d y ．w ee s t a b l i s h e de

11、e l lm o d e —M C F I O A K v l ‘5 【- ) e x p r e s s e da l o wl e v e lo f1 0 1 ．5a n dd e t e c t e d t h ee f f e c t so f K v l ．5o nc e l lp r o l i f e r a t i o n ，c e l ls i g n a l i n g a n dt h ei n t e r a c

12、 t i o n sb e t w e e nK v l ．5a n d C a v - 1 b y c e l lc o u n t i n g ，W e s t e r n b l o ta n d i m m u n o f l u o r e s c e n c e ．R e s u l t s ：( 1 1W e e s t a b l i s h e dK v l ．5k n o c k d o w n M C F l 0

13、A K v l _ 5 0 a n dc o n t r o l ( M C F l 0 A 幽u m e ) c e l ll i n e sr e s p e c t i v e l y ．T oa s s e s sc e l lp r o l i f e r a t i o n ，w ec o m p a r e dt h eg r o w t hc u r v e a n dt h ed o u b l et i m eb e

14、 t w e e nM C F l 0 A K v l 刑a n d M C F l 0 A s h u m e c e l l s ．K Ⅳ1 ．5 g e n ek n o c k ．d o w ni n h i b i t e dt h ep r o l i f e r a t i o no f M C F 10 A c e i l s ．a(chǎn) n di n c r e a s e d t h ee x p r e s s i o

15、n o f P C N A ．陀) W e s t e r nb l o ts h o w e d 廿l a tK v 1 ．5 g e n ek n o c k ．d o w ni n h i b i t e dt h ea c t i v a t i o no fA k ts i g n a l i n gp a t h w a y a n d p r o m o t e dt h ec r o s s - t a l kb e t

16、 w e e n N I A P K a n d A k t s i g n a l i n gp a t h w a y i nM C F l 0 A c e l l s ．f 3 】D u a l ．i m m u n o f l u o r e s c e n c ei n d i c a t e dt h a tb o m K v l ．5a n dC a v 一1w e r el o c a t e do nt h ec e

17、l l m e m b r a n e w i t h s t r o n gc o , l o c a l i z a t i o n i nM C F l 0 A c e l l s ．H o w e v e r ，b o t hC a v - 1a n d K V l ．5o n t h e c e l l m e m b r a n e w e r ed o w n r e g u l a t e d i nM C F 1O A

18、 。E c e l l s ．C o n c l u s i o n ：K v l ．5c o u l di n t e r a c tw i t hC a v ．1 i nh u m a n m a m m a r y e p i t h e l i a lc e l l sM C F IO Aa n di t sg e n ek n o c k - d o w nm a y i n h i b i tt h ec e l lp r