脂多糖對人肝內膽管上皮細胞IL-6-STAT3信號通路的影響及意義.pdf

1、目的：
　　研究脂多糖(LPS)刺激能否誘導正常人肝內膽管上皮細胞(HIBECs)白細胞介素-6(IL-6)/信號轉導與轉錄激活因子3(STAT3)信號通路的激活及對該信號通路下游因子c-Myc和髓樣細胞白血病-1(Mcl-1)表達的影響；探討LPS對HIBECs細胞增殖的影響及其可能存在的機制。
　　方法：
　　(1) HIBECs細胞常規(guī)體外培養(yǎng)，使用不同濃度的LPS(0、0.1、1、2、4、8μg/ml)分別刺激

2、該細胞，并分別作用24h、48h、72h，酶聯免疫吸附實驗(ELISA)檢測各濃度、各時間點IL-6的表達水平，確定LPS的最適刺激濃度及最佳處理時間，再以其進行后續(xù)實驗；(2)用前述所測LPS刺激HIBECs細胞，并設立正常細胞對照組，Western blot檢測磷酸化的STAT3（p-STAT3)蛋白和STAT3蛋白表達情況，確定p-STAT3/STAT3蛋白比例，探討LPS能否激活IL-6/STAT3信號通路；(3)再以前述所測L

3、PS干預HIBECs細胞，同時設立正常細胞對照組，分別采用熒光定量逆轉錄PCR(RT-qPCR)和Western blot測定c-Myc、Mcl-1的mRNA及蛋白表達水平，進一步探討LPS刺激對IL-6/STAT3信號通路下游因子表達的影響；(4)用前述所測LPS刺激HIBECs細胞，同時設立正常細胞對照組及空白對照組，MTT測定細胞增殖率，探討LPS刺激對HIBECs細胞增殖的影響。(5)運用SPSS16.0統(tǒng)計學軟件對上述結果進行

4、統(tǒng)計分析。
　　結果：
　　(1) ELISA檢測結果顯示：LPS刺激能夠促進HIBECs細胞分泌IL-6，并呈一定的時效、量效關系。在一定范圍內隨著LPS濃度的增加，IL-6的分泌逐漸增加，而且當LPS濃度為4μg/ml(F=16.492，P?0.001)，刺激時間為24h時(F=17.763，P＜0.01)，IL-6的分泌量達最大，然后隨LPS濃度的升高，刺激時間的延長逐漸下降；(2) Western blot結果顯示：

5、與正常細胞對照組相比，LPS刺激組p-STAT3/STAT3蛋白比例明顯增高(t=6.022，P＜0.05)；(3) RT-qPCR結果顯示：使用LPS處理后，HIBECs細胞c-Myc mRNA和Mcl-1 mRNA的表達明顯上調，較對照組分別上升了約36倍(t=14.59，P＜0.01)和2.4倍(t=19.10，P＜0.01)；Western blot結果顯示：與正常細胞對照組相比，LPS處理組c-Myc蛋白(t=46.45，P＜