IL-6-STAT3信號(hào)通路與肝硬變大鼠肝部分切除后肝再生的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的: 建立肝硬化大鼠肝部份切除模型,了解肝硬化大鼠與正常大鼠肝切除后肝再生過(guò)程的差異,探討IL-6/STAT3信號(hào)通路在肝硬變大鼠肝部分切除后肝再生障礙中的作用。
　　方法: 皮下注射50％四氯化碳橄欖油溶液+10%乙醇喂養(yǎng)的復(fù)合方法建立SPF級(jí)SD大鼠肝硬化模型,劑量為0.3ml/100g,時(shí)間為9周。正常大鼠為對(duì)照組。對(duì)照組及肝硬化組大鼠均切除肝臟中葉及左葉(約70%),分別于術(shù)后0h、1h、2h、4h、12h、24h、48

2、h及72h八個(gè)不同的時(shí)相點(diǎn)處死動(dòng)物模型,收集并保存殘肝組織及血液標(biāo)本,離心血液收集血清后-80℃保存,肝組織一部分-80℃保存?zhèn)溆?另一部分福爾馬林固定后48小時(shí)內(nèi)行石蠟包埋。全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定大鼠血清ALT、AST、ALB以了解大鼠肝功能變化,Elisa法檢測(cè)血清IL-6及血清TNF-α濃度,免疫組化二步法檢測(cè)殘肝組織切片PCNA陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)及活性STAT3蛋白陽(yáng)性細(xì)胞數(shù),常規(guī)病理切片光鏡觀察肝組織病理改變、有絲分裂細(xì)胞數(shù)。采用 SP

3、SS17.0和excel2003進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析及做圖,數(shù)據(jù)采用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(x土s)方式記錄,組間差別比較采用t檢驗(yàn),P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果: 1、在模型制作過(guò)程中,對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組共有5只死亡,其中實(shí)驗(yàn)組死亡2只,造模成功率分別為94.1%及93.0%,光學(xué)顯微鏡下HE染色可見(jiàn)肝硬化大鼠正常肝小葉結(jié)構(gòu)被破壞,纖維組織廣泛增生,形成假小葉,假小葉內(nèi)肝細(xì)胞索排列紊亂,可見(jiàn)小葉中央靜脈缺如、偏位、或有2個(gè)以上;對(duì)照組大鼠肝

4、組織正常,肝小葉形態(tài)結(jié)構(gòu)規(guī)則;2、各時(shí)間段實(shí)驗(yàn)組大鼠血清ALT、AST含量基本均高于對(duì)照組,而實(shí)驗(yàn)組大鼠血清ALB均低于對(duì)照組,但伴隨肝再生過(guò)程的進(jìn)展,肝功能均能逐漸恢復(fù);3、肝大部切除術(shù)后1-2d是肝臟增值最活躍階段,PCNA標(biāo)記細(xì)胞數(shù)及有絲分裂細(xì)胞數(shù)均于切除后12小時(shí)開(kāi)始迅速升高,并于切除后48小時(shí)達(dá)峰值,然后逐漸下降,肝硬化組有絲分裂細(xì)胞數(shù)也于術(shù)后12小時(shí)開(kāi)始升高,但術(shù)后24小時(shí)已達(dá)高峰并下降,肝硬化組 PCNA標(biāo)記細(xì)胞數(shù)在12小

5、時(shí)前均高于對(duì)照組,于切除后48小時(shí)達(dá)高峰后下降,其峰值遠(yuǎn)低于對(duì)照組;4、肝切除后,對(duì)照組血清IL-6水平在術(shù)后1h達(dá)高峰,后緩慢下降;而實(shí)驗(yàn)組則到術(shù)后12小時(shí)才緩慢到達(dá)高峰,之前均低于對(duì)照組,72h出現(xiàn)第二次高峰;肝切除后活性STAT3蛋白于2h達(dá)高峰后迅速下降至極低水平,但實(shí)驗(yàn)組2h STAT3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯低于對(duì)照組。
　　結(jié)論: 1、肝部份切除后肝硬化組肝細(xì)胞再生能力遠(yuǎn)低于對(duì)照組,肝硬化大鼠肝再生受抑制;2、肝硬化大鼠部分肝