QDPR基因過表達、敲低及K93T突變對高糖環(huán)境下腎小管上皮細胞的影響及其機制.pdf

1、目的：通過研究QDPR基因過表達、敲低及K93T突變對高糖環(huán)境下腎小管上皮細胞TGF-β1、CTGF、VEGF蛋白含量的影響，探討QDPR基因活性改變在DN發(fā)生發(fā)展中的作用及其機制。
　　方法：western blot方法檢測QDPR蛋白在大鼠肝、腦、腎皮質(zhì)、腎髓質(zhì)中的表達情況。免疫組化方法檢測QDPR蛋白在大鼠和人腎臟中的定位情況。用慢病毒感染腎小管上皮細胞系NRK-52E，制作QDPR過表達、敲低及K93T細胞模型?；诖四Ｐ?/p>

2、，研究高糖環(huán)境下（30mmol／L）QDPR基因改變對TGF-β1、CTGF、VEGF蛋白含量的影響，實驗采取以下分組：1 NRK-52E對照組（NRK-52E Control，NC）2 NRK-52E高糖組（NRK-52E exposed to High glucose，NHG）3空載過表達病毒對照組（overexpression lentivirus control，LV-OCON）4空載過表達病毒高糖組（overexpressio

3、n lentivirus control exposed to High glucose，LV-OCON-HG）5 QDPR基因過表達組（lentivirus overexpressed QDPR，LV-QDPR）6 QDPR基因過表達高糖組（lentivirus overexpressed QDPR exposed to High glucose，LV-QDPR-HG）7 QDPR蛋白 K93T突變組（lentivirus overe

4、xpressed K93T QDPR，K93T-QDPR）8 K93T突變過表達高糖環(huán)境組（lentivirus overexpressed K93T QDPR exposed to High glucose，K93T-QDPR-HG）9敲低對照組（LV-SHCON）10敲低對照高糖組（LV-SHCON-HG）11 QDPR基因敲低組（LV-SHQDPR）12 QDPR基因敲低對照組（LV-SHQDPR-HG）。每組細胞重復(fù)3皿，測定高

5、糖環(huán)境下QDPR及K93T突變對其酶活性的影響；對各組用western-blot法檢測高糖環(huán)境下QDPR表達改變及K93T突變對TGF-β1、CTGF和VEGF蛋白含量的影響。
　　結(jié)果：1 QDPR蛋白在大鼠肝、腦、腎皮質(zhì)、腎髓質(zhì)中高表達，胰腺中等量表達。QDPR蛋白在大鼠和人的腎臟，腎小管，尤其是近曲小管上皮細胞高表達。2通過慢病毒轉(zhuǎn)染成功構(gòu)建了QDPR基因過表達、敲低及K93T突變腎小管上皮細胞模型。3正常糖環(huán)境下 K93T

6、-QDPR組 QDPR酶活性低于LV-QDPR組（P＜0.05），高糖環(huán)境下LV-QDPR-HG組酶活性低于LV-QDPR組（P＜0.05）。4高糖環(huán)境下NHG組TGF-β1蛋白含量高于NC組（P＜0.01）。正常糖環(huán)境下空載病毒LV-OCON組TGF-β1表達水平無明顯改變；而高糖環(huán)境對TGF-β1含量影響不明顯。過表達QDPR基因LV-QDPR組與LV-OCON組相比TGF-β1蛋白含量增高（P＜0.05）；而高糖環(huán)境下LV-QDP

7、R-HG與LV-QDPR組相比TGF-β1表達量顯著增高（P＜0.01），與LV-OCON-HG組相比顯著增高（P＜0.001）。正常糖環(huán)境下敲低對照組LV-SHCON與NC組相比TGF-β1表達量降低；而高糖環(huán)境下TGF-β1表達量無明顯變化。敲低QDPR基因組LV-SHQDPR在正常和高糖環(huán)境下對TGF-β1表達量無明顯影響。正常糖環(huán)境下K93T突變組與LV-QDPR組相比TGF-β1含量降低，在高糖環(huán)境下能使TGF-β1表達量增高

8、，但低于LV-QDPR-HG組（P＜0.05）。5高糖環(huán)境下NHG組CTGF蛋白含量高于NC組（P＜0.05）。正常糖環(huán)境下空載病毒LV-OCON組與NC組相比CTGF表達含量無明顯改變；而高糖環(huán)境下CTGF無明顯改變。正常糖環(huán)境下過表達QDPR基因LV-QDPR組與LV-OCON組相比CTGF表達含量無明顯改變；而高糖環(huán)境下CTGF表達量與LV-QDPR組相比增高（P＜0.01），與LV-OCON-HG組相比顯著增高（P＜0.01）。

9、正常糖環(huán)境下敲低對照組LV-SHCON與NC組相比CTGF表達量有降低的趨勢；而高糖環(huán)境下LV-SHQDPR組CTGF表達量無明顯改變。正常糖環(huán)境下K93T突變與LV-QDPR組相比CTGF表達含量增高（P＜0.05）；而高糖環(huán)境能使CTGF表達量增高，但低于LV-QDPR-HG組（P＜0.05）。6高糖環(huán)境下NHG組VEGF蛋白含量低于NC組（P＜0.05）?？蛰d病毒LV-OCON組與NC組相比VEGF水平增高；高糖環(huán)境下與NHG相比

10、VEGF水平增高（P＜0.05）。正常糖環(huán)境下過表達QDPR基因LV-QDPR組與LV-OCON組相比VEGF蛋白含量無明顯改變；高糖環(huán)境下VEGF表達量與LV-QDPR組相比降低（P＜0.05），也顯著低于LV-OCON-HG組（P＜0.05）。正常糖環(huán)境下敲低對照組LV-SHCON組與NC組相比VEGF表達量增高（P＜0.05）；而高糖環(huán)境下 VEGF表達量顯著降低（P＜0.01）。敲低QDPR基因組LV-SHQDPR與LV-SHC

11、ON組相比VEGF表達量降低（P＜0.01）；而高糖環(huán)境能使VEGF有減少的趨勢。在正常糖環(huán)境下K93T突變組與LV-OCON、LV-QDPR組相比VEGF表達量變化不大；而在高糖環(huán)境下能使VEGF表達量降低，但高于LV-QDPR-HG組（P＜0.05）。
　　結(jié)論：1 QDPR基因能影響TGF-β1、CTGF及VEGF蛋白含量，提示過表達QDPR基因在一定程度上促進DN的發(fā)生發(fā)展。2敲低QDPR基因及K93T突變導(dǎo)致QDPR酶活