甘氨酸對奶牛乳腺上皮細胞增殖、凋亡及免疫因子基因表達影響的研究.pdf

1、本研究是以體外培養(yǎng)的奶牛乳腺上皮細胞為試驗對象，探究甘氨酸(Gly)對奶牛乳腺上皮細胞增殖、凋亡以及免疫應(yīng)答的影響。試驗分別測定了Gly培養(yǎng)乳腺上皮細胞后，細胞的增殖活性、細胞周期變化、細胞凋亡率以及四種免疫因子（IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α）的基因表達量，旨在闡明Gly是否參與奶牛乳腺上皮細胞的生長和免疫調(diào)節(jié)過程以及對乳腺上皮細胞免疫應(yīng)答產(chǎn)生的影響。本論文的研究內(nèi)容和結(jié)果如下:
　　1、膠原酶消化法分離出奶牛乳腺上

2、皮細胞，培養(yǎng)基中添加0、1、2、5、10和20 mmol/L的Gly后在體外條件下培養(yǎng)細胞24、48和72 h，用MTT法檢測細胞增殖活性。結(jié)果表明，Gly對奶牛乳腺上皮細胞增殖活性有低濃度(1mmol/L)促進，高濃度(10-20 mmol/L)顯著抑制的作用(P＜0.05)。
　　2、使用流式細胞儀技術(shù)，應(yīng)用AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法檢測不同濃度Gly（0、1、2、5、10和20 mmol/L）培養(yǎng)后的奶牛乳腺上皮

3、細胞周期，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Gly能夠顯著促進乳腺上皮細胞的細胞周期向S期和G2/M期轉(zhuǎn)化(P＜0.05)，并促進細胞分裂。
　　3、使用流式細胞儀技術(shù)，應(yīng)用AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法檢測不同濃度Gly（0、1、2、5、10和20 mmol/L）培養(yǎng)后的奶牛乳腺上皮細胞的凋亡率，結(jié)果顯示，Gly對乳腺上皮細胞凋亡具有促進作用(P＜0.05)，本試驗中，Gly濃度為20 mmol/L時細胞凋亡率最大。
　　4、不同濃度Gl

4、y（0、1、2、5、10和20 mmol/L）培養(yǎng)奶牛乳腺上皮細胞后，提取出總RNA，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄成cDNA后，采用Real-Time PCR法檢測免疫因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α的基因表達量，所得PCR產(chǎn)物用于瓊脂糖凝膠電泳試驗。結(jié)果表明，體外培養(yǎng)的奶牛乳腺上皮細胞具有分泌IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α的能力，Gly可以顯著上調(diào)這四種免疫因子的基因表達水平(P＜0.05)，Gly濃度為5 mmol/L時，對這