CLA對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞TAG合成及相關(guān)基因mRNA轉(zhuǎn)錄的影響.pdf

1、共軛亞油酸(Conjugated linoleic acid，CLA)是指一組具有位置和幾何異構(gòu)的十八碳共軛二烯酸的總稱。它廣泛存在于自然界中，在反芻動(dòng)物的肉制品和乳制品中含量較多。動(dòng)物和人體試驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)CLA具有諸多生理功能，主要包括抗癌、抗動(dòng)脈粥樣硬化、降低膽固醇、降低體脂、減少脂肪沉積、調(diào)節(jié)骨組織代謝、強(qiáng)化機(jī)體免疫和抗糖尿病。
　　 基于CLA的生理功能，營(yíng)養(yǎng)學(xué)家們努力提高乳中CLA含量，但研究發(fā)現(xiàn)，提高乳中CLA含量的同

2、時(shí)，卻導(dǎo)致奶牛乳脂降低綜合癥(MFD)。目前研究證實(shí)t10，c12-CLA可能是導(dǎo)致奶牛乳脂降低綜合癥(MFD)的主要原因，因此本試驗(yàn)采用組織塊法體外培養(yǎng)奶牛乳腺上皮細(xì)胞，探索c9，t11-CLA和t10，c12-CLA純品對(duì)乳腺細(xì)胞內(nèi)乳脂合成及相關(guān)基因mRNA轉(zhuǎn)錄的影響。在分子水平上，探討CLA對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞甘油三酯(TAG)含量及脂肪酸合成相關(guān)基因mRNA轉(zhuǎn)錄的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明:
　　 (1)采用組織塊法實(shí)現(xiàn)了體外培養(yǎng)

3、出奶牛乳腺上皮細(xì)胞，細(xì)胞成活率較高，達(dá)到85％以上;經(jīng)過(guò)多次傳代和角蛋白18鑒定后，可得到純化的奶牛乳腺上皮細(xì)胞。測(cè)定乳腺上皮細(xì)胞的相關(guān)生物學(xué)性狀，試驗(yàn)結(jié)果為細(xì)胞生長(zhǎng)曲線呈“S”型，符合一般細(xì)胞生長(zhǎng)規(guī)律:細(xì)胞群體倍增時(shí)間為32.18h;細(xì)胞接種存活率最高可達(dá)87％。
　　 (2)試驗(yàn)結(jié)果表明，c9，t11 CLA和t10，c12 CLA均可顯著降低乳腺上皮細(xì)胞內(nèi)TAG含量(P＜0.05)，且t10，c12 CLA對(duì)TAG的抑制率

4、高于c9，t11 CLA。
　　 (3)氣相色譜檢測(cè)CLA對(duì)細(xì)胞中脂肪酸組成的影響，結(jié)果表明150μmol/L c9，t11 CLA可顯著提高細(xì)胞內(nèi)單不飽和脂肪酸(MUFA)的比例（P＜0.05），而50μmol/L c9，t11-CLA顯著增加細(xì)胞內(nèi)飽和脂肪酸(SFA)的比例(P＜0.05);細(xì)胞內(nèi)MUFA的比例隨著t10，c12 CLA濃度的增加，呈顯著下降趨勢(shì)（P＜0.05）;兩種CLA對(duì)多不飽和脂肪酸(PUFA)的比例都

5、沒(méi)有顯著影響(P＞0.05)。
　　 (4)外源添加不同濃度的c9，t11-CLA與t10，c12-CLA直接作用于乳腺上皮細(xì)胞48 h，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，測(cè)定乳腺上皮細(xì)胞脂肪酸攝取與轉(zhuǎn)運(yùn)及甘油三酯合成相關(guān)基因mRNA的轉(zhuǎn)錄。試驗(yàn)結(jié)果:與對(duì)照組相比，50～150μmol/L的c9，t11 CLA和t10，c12 CLA均顯著下調(diào)LPL基因mRNA的轉(zhuǎn)錄水平（P＜0.05）;50μmol/L c9，t11 CLA顯著下調(diào)

6、CD36基因mRNA的轉(zhuǎn)錄水平（P＜0.05），150μmol/L c9，t11 CLA上調(diào)它的轉(zhuǎn)錄水平（P＜0.05），CD36mRNA的轉(zhuǎn)錄水平隨t10，c12 CLA濃度增加呈顯著上升趨勢(shì)（P＜0.05）;150μmol/L c9，t11CLA和不同濃度的t10，c12 CLA均可顯著上調(diào)ACBP基因mRNA的轉(zhuǎn)錄水平(P＜0.05);相比對(duì)照組，c9，t11 CLA與t10，c12 CLA均顯著下調(diào)FABP3基因mRNA的轉(zhuǎn)錄水