鈣離子濃度對奶牛乳腺上皮細胞增殖及免疫的影響.pdf

1、本試驗采用組織塊法分離培養(yǎng)奶牛乳腺上皮細胞，采用多種方法純化細胞。并以細胞為試驗模型，采用HPLC、MTT、FCM法檢測BMEC在不同Ca2+濃度處理后，單層細胞通透性與細胞凋亡的情況;并研究了不同Ca2+濃度與LPS刺激后細胞因子mRNA、MAPK和NF-κB蛋白的表達。
　　 試驗一用組織塊培養(yǎng)法獲得大量奶牛的原代乳腺上皮細胞，聯(lián)合運用刮除法、相差消化和相差貼壁法、單克隆法可獲得純化的、活力旺盛的乳腺上皮細胞，經(jīng)形態(tài)學鑒定為

2、上皮細胞。用不同Ca2+濃度的培養(yǎng)基孵育細胞，通過HPLC法檢測單層細胞通透性。結果表明:降低胞外Ca2+濃度對緊密連接具有破壞作用。
　　 試驗二通過MTT法檢測不同Ca2+濃度對奶牛乳腺上皮細胞增殖的影響。結果表明:各濃度處理組較對照組對細胞增殖均有抑制作用，濃度越低抑制作用越明顯;處理細胞48h較24h和72h對細胞增殖的影響更明顯。此外，采用FCM法檢測不同Ca2+濃度在48h時對細胞凋亡的影響。結果表明:0.45mmo

3、l/L濃度組對細胞凋亡和細胞存活率影響最顯著。說明降低胞外Ca2+濃度對細胞凋亡具有促進作用。
　　 試驗三不同Ca2+濃度與LPS組合刺激奶牛乳腺上皮細胞，采用相對實時熒光定量法檢測IL-1β、IL-6和IFN的mRNA表達。結果表明:在不同Ca2+濃度與LPS刺激下，三種細胞因子的表達量有所提高，IL-1β與IFN較對照組變化顯著，但IL-6變化不明顯。此外，采用ELISA法在蛋白水平上檢測24h時MAPK和NF-κB蛋白的