SYK基因?qū)δ膛Ｈ橄偕掀ぜ?xì)胞增殖的影響研究.pdf

1、牛是畜牧業(yè)中最重要的經(jīng)濟(jì)動(dòng)物，牛奶的產(chǎn)量和質(zhì)量是衡量畜牧業(yè)水平和經(jīng)濟(jì)效益的一個(gè)重要標(biāo)準(zhǔn)。我國(guó)雖是世界奶牛養(yǎng)殖大國(guó)，但奶牛的平均單產(chǎn)世界的平均水平低。牛奶中的乳脂和乳蛋白的含量相對(duì)較低，對(duì)消費(fèi)者的消費(fèi)需求產(chǎn)生嚴(yán)重影響。乳汁是由乳腺腺泡的分泌細(xì)胞產(chǎn)生的。每個(gè)乳腺腺泡都由一層分泌上皮細(xì)胞構(gòu)成，這些高度特化的腺泡上皮細(xì)胞是奶牛乳腺泌乳的基本單位。腺泡上皮細(xì)胞一直持續(xù)增殖直達(dá)泌乳早期，乳腺分泌乳汁的能力由腺泡上皮細(xì)胞的數(shù)量決定。奶牛乳腺組織的發(fā)育

2、及產(chǎn)生乳汁的過程當(dāng)中，一些重要基因的表達(dá)變化是調(diào)節(jié)腺泡上皮細(xì)胞分化、增殖以及乳汁合成、分泌、轉(zhuǎn)運(yùn)等生理過程的基礎(chǔ)。因此，篩選對(duì)奶牛乳腺組織的發(fā)育和產(chǎn)生乳汁有調(diào)節(jié)作用的基因以及鑒定這些基因的功能對(duì)提高奶牛乳腺的泌乳能力、促進(jìn)我國(guó)乳品業(yè)的發(fā)展有重要作用。脾源性酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase，SYK)是一種非受體型的蛋白酪氨酸激酶，在造血細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞、肝細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞以及乳腺組織中都有所表達(dá)。SYK

3、是一些細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)途徑中關(guān)鍵的激酶，主要有調(diào)節(jié)細(xì)胞分化和增殖等作用。對(duì)于SYK基因的研究在乳腺癌案例中較多，但在正常的乳腺中研究較少。
　　本研究選取泌乳期高乳品質(zhì)、泌乳期低乳品質(zhì)和干乳期的中國(guó)荷斯坦奶牛，采用蛋白免疫印跡法和激光共聚焦顯微技術(shù)研究SYK基因在不同生理狀態(tài)和泌乳性狀的奶牛乳腺中的表達(dá)含量與表達(dá)部位變化;采用基因干擾和過表達(dá)技術(shù)研究SYK基因?qū)δ膛Ｈ橄偕掀ぜ?xì)胞增殖以及增殖相關(guān)信號(hào)分子表達(dá)的影響;采用雙熒光素酶報(bào)告基因

4、系統(tǒng)研究SYK基因調(diào)節(jié)奶牛乳腺上皮細(xì)胞增殖的分子機(jī)制。Western blotting和激光共聚焦結(jié)果顯示干乳期奶牛乳腺組織中SYK的表達(dá)顯著高于泌乳期的奶牛乳腺組織。在干乳期的荷斯坦奶牛乳腺中，SYK主要在乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞的胞質(zhì)中表達(dá)。而在泌乳期，SYK主要在奶牛乳腺腺泡上皮細(xì)胞的胞質(zhì)中表達(dá)?；蚋蓴_和過表達(dá)結(jié)果顯示SYK表達(dá)降低時(shí)，奶牛乳腺上皮細(xì)胞的增殖能力下降，β-酪蛋白的表達(dá)量降低，同時(shí)與細(xì)胞增殖相關(guān)信號(hào)分子AKT1和MAPK等

5、蛋白表達(dá)量也相對(duì)降低;而SYK過表達(dá)時(shí)，細(xì)胞增殖增加、β-酪蛋白、AKT1和MAPK的蛋白表達(dá)量上調(diào)。雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)研究結(jié)果顯示奶牛乳腺上皮細(xì)胞中SYK可以激活A(yù)KT1啟動(dòng)子的活性，其作用位點(diǎn)位于AKT1啟動(dòng)子區(qū)-439～+83bp的序列范圍。這些結(jié)果表明SYK是奶牛乳腺上皮細(xì)胞增殖與分化的調(diào)節(jié)因子，SYK基因通過調(diào)節(jié)AKT1的轉(zhuǎn)錄活性促進(jìn)奶牛乳腺上皮細(xì)胞增殖，為干乳期乳腺組織重建做準(zhǔn)備。這項(xiàng)研究結(jié)果可以豐富泌乳生物學(xué)理論，為提