不同培養(yǎng)代數(shù)及葡萄糖、氨基酸對奶牛乳腺上皮細(xì)胞酪蛋白基因表達(dá)的影響.pdf

1、本試驗(yàn)以體外培養(yǎng)的分離于泌乳期荷斯坦奶牛乳腺組織的乳腺上皮細(xì)胞（BMECs）為研究對象，研究不同代數(shù)對酪蛋白基因表達(dá)的影響，在此基礎(chǔ)之上，選擇原代（P0）和二代（P2）細(xì)胞分析賴氨酸(Lys)、蛋氨酸(Met)及葡萄糖（Glc）對 BMECs酪蛋白基因表達(dá)的影響，同時(shí)也進(jìn)一步驗(yàn)證合適的細(xì)胞代數(shù)為相關(guān)研究試驗(yàn)材料的選擇提供理論依據(jù)。
　　利用Real-Time PCR檢測技術(shù)對BMECs P0-P5細(xì)胞中αs1-casein，β-c

2、asein，κ-casein基因表達(dá)進(jìn)行檢測，結(jié)果表明：αs1-casein在P0細(xì)胞中表達(dá)量極顯著高于P1-P5（P<0.01），P1-P5之間無顯著差異（P>0.05）；β-casein在P0細(xì)胞中表達(dá)量顯著高于P1–P3（P<0.05），極顯著高于P4-P5(P<0.01)；κ-casein在P0細(xì)胞中表達(dá)量顯著高于P3-P5（P<0.05），與 P1，P2細(xì)胞無顯著差異（P>0.05），初步確定P2或P3BMECs可以應(yīng)用于泌乳

3、機(jī)理等相關(guān)研究。
　　2.以體外培養(yǎng)的P0和P2 BMECs為模型，研究培養(yǎng)體系中添加Lys、Met、及Glc對酪蛋白基因表達(dá)的影響。以不做任何處理的細(xì)胞為對照組，添加Glc為處理組Ⅰ、Lys+Met為處理組Ⅱ、Lys+Met+Glc為處理組Ⅲ。通過添加Lys、Met、及Glc對比P0和P2細(xì)胞中酪蛋白基因表達(dá)。處理時(shí)間為24h，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，通過Real-Time PCR方法檢測不同處理對P0和P2細(xì)胞中αs1-casein

4、，β-casein，κ-casein基因表達(dá)的影響。結(jié)果表明：⑴ P0和P2細(xì)胞3個(gè)處理組中酪蛋白基因表達(dá)量全部高于對照組。其中P0細(xì)胞處理組Ⅲ和處理組Ⅰ中αs1-casein，β-casein基因表達(dá)量顯著高于（P﹤0.05）處理組Ⅱ和對照組，處理組Ⅲ高于處理組Ⅰ，差異不顯著（P﹥0.05）；κ-casein在對照組、處理組Ⅱ、處理組Ⅰ、處理組Ⅲ中的表達(dá)量依次遞增，但差異不顯著（P﹥0.05）；對于P2細(xì)胞，β-casein在處理組Ⅲ

5、中表達(dá)量高于（P﹥0.05）處理組Ⅰ，處理組Ⅲ、處理組Ⅰ表達(dá)量顯著（P﹤0.05）高于處理組Ⅱ和對照組，處理組Ⅱ高于對照組但差異并不顯著（P﹥0.05）。αs1-casein，κ-casein在對照組，處理組Ⅱ，處理組Ⅰ，處理組Ⅲ中表達(dá)量依次遞增，但差異不顯著（P﹥0.05）；⑵P0細(xì)胞各處理組基因表達(dá)量均高于P2細(xì)胞，但差異不顯著（P﹥0.05）。
　　綜上所述，BMECs培養(yǎng)體系中混合添加Lys、Met、及Glc對BMECs中