CD40分子在人宮頸癌組織中表達(dá)的臨床意義及CD40信號(hào)對(duì)宮頸癌細(xì)胞株SiHa體外的生物學(xué)效應(yīng).pdf

1、子宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤，發(fā)病率在女性惡性腫瘤中居第二位，僅次于乳腺癌。近幾年國(guó)內(nèi)外報(bào)道宮頸癌的發(fā)病率和病死率有年輕化的傾向，35歲以下的婦女宮頸癌發(fā)病率明顯上升。因此對(duì)宮頸癌病因、發(fā)病機(jī)制的研究，以及尋求更敏感的宮頸癌早期診斷、更有效的治療方法成為非常必要。 CD40是分子量48KD的細(xì)胞表面分子，表達(dá)于許多類型細(xì)胞中，包括B細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、單核細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞以及一系列腫瘤細(xì)胞。CD40屬于腫瘤壞死因子受體（TNFR）超

2、家族成員。CD40分子的配體CD40L主要表達(dá)于活化的CD4+T輔助（Th）細(xì)胞。CD40L/CD40相互作用是特異性免疫應(yīng)答及其過程中主要的協(xié)同刺激信號(hào)。大量研究表明，CD40分子可以介導(dǎo)B細(xì)胞的增殖、分化、抗體分泌及其類型轉(zhuǎn)換、樹突狀細(xì)胞的激發(fā)及分化成熟，內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子的改變，炎癥因子的釋放以及白細(xì)胞在炎癥部位的聚集等。這表明CD40是免疫反應(yīng)中的重要分子。 本研究主要探討CD40及其相關(guān)分子在宮頸癌組織上的表達(dá)及其臨床生

3、物學(xué)意義；討論宮頸癌細(xì)胞株SiHah表達(dá)CD40及其生物學(xué)影響；CD40對(duì)用于宮頸癌治療的化療藥物敏感性的影響。期望尋找宮頸癌腫瘤個(gè)性化免疫治療的新方案。 一、CD40及其相關(guān)分子在宮頸癌中的表達(dá)及生物學(xué)意義目的：研究宮頸癌組織中CD40分子的表達(dá)、并探討其與宮頸癌侵襲、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為的相關(guān)性，分析HPV16/18E6、p16INK4a、VEGF、CD34分子在宮頸癌組織中的表達(dá)及其與CD40表達(dá)的相關(guān)性。方法：采用免疫

4、組織化學(xué)方法，對(duì)239例宮頸組織標(biāo)本切片（包括正常子宮頸組織38例，慢性宮頸炎43例，宮頸上皮內(nèi)瘤變CINⅠ級(jí)36例，CINⅡ級(jí)39例，CINⅢ級(jí)27例，宮頸鱗狀上皮癌56例）檢測(cè)CD40分子的表達(dá)；同時(shí)檢測(cè)了HPV16/18E6、p16INK4a、VEGF、CD34在宮頸組織中的表達(dá)。結(jié)果：CD40分子在正常宮頸組織、慢性宮頸炎組織和CINⅠ～Ⅱ上不表達(dá)或弱表達(dá)，而CINⅢ和宮頸癌組織上表達(dá)明顯增加，陽性率分別達(dá)55.55%和67.8

5、6%，差異有顯著性（p<0.01）。CD40分子在宮頸癌中的表達(dá)與宮頸癌的FIGO臨床分期（r=0.05，p>0.05）、病理分級(jí)（r=—0.12，p>0.05）無相關(guān)性，而與腫瘤肌層浸潤(rùn)深度（r=0.44，p<0.01）、有無淋巴轉(zhuǎn)移（r=0.30，p<0.05）有明顯的相關(guān)性。宮頸癌組織中HPV16/18E6、p16INK4a、VEGF分子表達(dá)均較正常組織高（78.60、80.36%、87.50%）。CD34MVD在宮頸癌組織上表達(dá)

6、為27.02±10.68，明顯較其它各組增高（p<0.001）。HPV16/18—E6陽性表達(dá)的宮頸CINⅡ～Ⅲ組織中，P16INK4a表達(dá)陽性者占90.47%，HPV16/18—E6陽性表達(dá)的宮頸癌組織中，P16INK4a表達(dá)陽性達(dá)97.72%，因此P16INK4a在宮頸CINⅡ～Ⅲ及宮頸癌中的表達(dá)和HPV16/18—E6的陽性表達(dá)有明顯的相關(guān)性（r=0.362，p<0.05；r=0.837，p<0.01）。CD40分子的表達(dá)和P16

7、INK4a的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.52，p<0.01）；和HPV16/18—E6、VEGF以及CD34MVD的表達(dá)亦有一定的正相關(guān)性（r=0.57，p<0.01；r=0.32，p<0.05；r=0.37，p<0.05）。結(jié)論：CD40可作為宮頸癌診斷、預(yù)后和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移評(píng)估的客觀指標(biāo)。CD40分子表達(dá)與抑癌基因p16INK4a、HPV16/18—E6以及VEGF和CD34MVD的表達(dá)有一定的正相關(guān)性，由此提示CD40分子在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)

8、展過程中可能起著非常重要的作用。 二、激發(fā)型CD40單抗對(duì)宮頸癌細(xì)胞株體外增殖和化學(xué)藥物敏感性的作用目的：研究CD40分子激發(fā)對(duì)宮頸癌細(xì)胞SiHa化療敏感性的影響及其機(jī)制。 方法：采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)宮頸癌細(xì)胞SiHa上CD40分子的表達(dá)，MTT法檢測(cè)CD40單抗（5C11）聯(lián)合化療藥物對(duì)SiHa細(xì)胞的作用，PI染色檢測(cè)SiHa細(xì)胞周期的變化，AnnexinⅤ—PI法檢測(cè)細(xì)胞凋亡、Real—timePCR方法分析單抗5C1

9、1作用SiHa細(xì)胞后凋亡基因表達(dá)水平變化。結(jié)果：宮頸癌SiHa細(xì)胞表面CD40表達(dá)率為96.0%，SiHa細(xì)胞經(jīng)5C11作用后出現(xiàn)G2/M期阻滯，5C11和化療藥物鹽酸吉西他濱（Gemcitabin）各自抑制細(xì)胞生長(zhǎng)作用不明顯，但兩者聯(lián)合能顯著抑制SiHa的生長(zhǎng)和促進(jìn)凋亡。SiHa細(xì)胞在和5C11作用24小時(shí)后，抗調(diào)亡基因BCL—XL的表達(dá)明顯下調(diào)，促調(diào)亡基因BAX的上調(diào)作用不明顯。結(jié)論：CD40分子通過介導(dǎo)G2/M期阻滯和調(diào)節(jié)凋亡基因