第一部分：米諾環(huán)素對大鼠和小鼠腦外傷的部分保護(hù)作用;第二部分：半胱氨酰白三烯受體1和2在缺血性損傷誘導(dǎo)PC12細(xì)胞死亡中的不同作用.pdf

1、本研究工作分為兩部分：　　第一部分：米諾環(huán)素對大鼠和小鼠腦外傷的部分保護(hù)作用。 本實驗為了系統(tǒng)評價米諾環(huán)素究竟有無臨床治療腦外傷價值，在大鼠腦撞擊傷、小鼠閉合性腦外傷、小鼠腦冷凍傷三個常用的腦外傷動物模型觀察該藥對不同腦外傷的療效。米諾環(huán)素于手術(shù)前2天開始給予，每天2次，每次45mg/kg腹腔注射；手術(shù)前30min及手術(shù)后1h，各給藥1次；手術(shù)后第1、2天，每天給藥1次。觀察手術(shù)后行為學(xué)變化，在14天后計算腦損傷面積及神經(jīng)元數(shù)

2、量。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)，大鼠腦撞擊傷可表現(xiàn)神經(jīng)功能、腦水腫及形態(tài)學(xué)明顯改變，而米諾環(huán)素能加快肢體功能(爬板角度)恢復(fù)，抑制損傷側(cè)腦半球面積的增加(顯示其能抑制腦水腫)，但對其他指標(biāo)無明顯作用；小鼠腦閉合性損傷引起明顯的學(xué)習(xí)記憶功能的損害，以及損傷側(cè)神經(jīng)元減少，但不引起明顯的神經(jīng)功能缺失，米諾環(huán)素能抑制神經(jīng)元減少，改善閉合傷引起的學(xué)習(xí)記憶功能下降，對其它行為學(xué)變化無明顯作用；小鼠腦冷凍傷是閉合性物理損傷，損傷灶較局限，損傷后神經(jīng)功能、學(xué)習(xí)

3、記憶改變不明顯，但有明顯的形態(tài)學(xué)改變，并且其死亡率也能用于藥物作用的評價，米諾環(huán)素能減少小鼠死亡率及腦損傷面積，對神經(jīng)元減少的保護(hù)作用不明顯。 結(jié)果顯示：米諾環(huán)素對三種不同腦外傷模型，在損傷后14d內(nèi)均有不完全的、不同的治療效果。另外，由于動物種類、損傷程度、代償功能的不同，不同腦外傷模型都有各自特點。 第二部分：半胱氨酰白三烯受體1和2在缺血性損傷誘導(dǎo)PC12細(xì)胞死亡中的不同作用 近年來，本實驗室發(fā)現(xiàn)半胱氨酰白

4、三烯受體-1 (CysLT1受體)選擇性拮抗劑普魯司特(pranlukast, ONO-1078)和孟魯司特(montelukast )對大鼠和小鼠局灶性腦缺血和全腦缺血均有保護(hù)作用，能夠改善缺血后的神經(jīng)癥狀，減少梗死體積，降低血腦屏障的通透性，減輕腦水腫及神經(jīng)元死亡。然而，在原代培養(yǎng)神經(jīng)元上，未能觀察到CysLT1受體拮抗劑的保護(hù)作用。 為了深入研究CysLT1和CysLT2受體在缺血性損傷過程中的作用，本文在神經(jīng)元樣細(xì)胞--

5、大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤株P(guān)C12細(xì)胞上穩(wěn)定表達(dá)CysLT1和CysLT2受體，以缺氧缺糖(oxygen鄉(xiāng)ucose deprivation, OGD)誘導(dǎo)體外缺血性損傷，用Hoechst33258和PI染色以及流式細(xì)胞儀，測定OGD誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡率，探討兩種受體亞型及其拮抗劑的作用。 研究發(fā)現(xiàn)，PC12/mCysLT2(轉(zhuǎn)染小鼠CysLT2受體)細(xì)胞的胞體面積明顯增大，而PC12/WT(轉(zhuǎn)染pcDNA3.0空質(zhì)粒)和PC12/mCysL

6、TI(轉(zhuǎn)染小鼠CysLT1受體)細(xì)胞沒有明顯改變。OGD 6小時主要誘導(dǎo)細(xì)胞晚期凋亡和少量的壞死，Hoechst/PI染色和流式細(xì)胞儀測定結(jié)果均顯示，PC12/mCysLT2細(xì)胞的凋亡率和壞死率，比PC12/WT細(xì)胞明顯增加，而PC12/mCysLT1細(xì)胞的凋亡和壞死率明顯減少，提示兩種受體表達(dá)的水平可以調(diào)節(jié)PC12細(xì)胞對OGD損傷的敏感性。CysLT1受體選擇性拮抗劑孟魯司不能逆轉(zhuǎn)PC12/mCysLT1細(xì)胞引起的凋亡減輕，而非選擇性