離體加倍創(chuàng)造柑橘多倍體種質(zhì)及其細(xì)胞學(xué)和分子鑒定.pdf

1、通過(guò)染色體加倍創(chuàng)造多倍體是開(kāi)展倍性雜交獲得柑橘無(wú)核新種質(zhì)的一個(gè)重要途徑，也是柑橘育種主要目標(biāo)之一。本研究用colchicine(簡(jiǎn)寫(xiě)col)和oryzalin(簡(jiǎn)寫(xiě)ory)處理柑橘原生質(zhì)體和/或愈傷組織，主要結(jié)果如下： 1、用0.01％、0.05％、0.1％的colchicine和0.005％、0.01％、0.02％的oryzalin處理寧波金柑(Fortunellacrassifoliacv.Meiwa)原生質(zhì)體24h，結(jié)果表

2、明：隨著濃度的提高，原生質(zhì)體活力降低，但oryzalin比colchicine的毒性低，前者處理的原生質(zhì)體活性較高；原生質(zhì)體處理后活性最高的處理是0.005％ory和0.01％col，分別達(dá)到90.51％和88.23％。用0.01％、0.05％、0.1％的col處理伏令夏橙(Citrussinensiscv.Valencia)原生質(zhì)體8h后，原生質(zhì)體活性急劇下降；當(dāng)處理時(shí)間為8h，濃度為0.05％時(shí)，活力達(dá)到最高85.85％。

3、2、用0.01％、0.05％、0.1％的colchicine處理佛羅斯特(Csinensiscv.Frost)臍橙愈傷組織2d、4d、8d，結(jié)果表明：在0.1％col-4d和0.1％col-8d處理中分別檢測(cè)到1個(gè)和5個(gè)四倍體胚狀體，目前各獲得1棵四倍體植株。此外，在0.1％col-8d處理中檢測(cè)到1個(gè)嵌合體胚狀體。 3、用0.01％、0.05％、0.1％的colchicine分別處理寧波金柑原生質(zhì)體8h、16h、24h，其中0

4、.05％col-24h處理的四倍體單細(xì)胞系誘導(dǎo)率最高(30.77％)，其次是0.1％col-8h和0.01％col-24h，誘導(dǎo)率分別為19.23％和17.71％。其中處理0.05％col-24h再生愈傷組織，處理0.1％col-16h再生胚狀體，而處理0.1％col-8h獲得的愈傷組織成功再生出芽。用0.005％、0.01％、0.02％的oryzalin處理寧波金柑原生質(zhì)體24h和48h，未檢測(cè)到四倍體胚狀體。0.01％、0.05％、

5、0.1％的colchicine處理伏令夏橙原生質(zhì)體2h和4h，結(jié)果只有處理0.01％col-4h得到四倍體單細(xì)胞系，誘導(dǎo)率為22.86％，四倍體愈傷組織再生胚狀體，但未能再生成芽。 4、測(cè)定了寧波金柑、國(guó)慶1號(hào)(C.unshiu‘GuoqingNo.1’)和伏令夏橙的二倍體和四倍體細(xì)胞直徑。三個(gè)品種的二倍體細(xì)胞直徑分別為20.40±2.47μm、21.53±2.87μm、21.50±3.27μm;四倍體細(xì)胞直徑分別為29.50±

6、2.62μm、33.00±3.15μm、29.75±2.88μm。 5、測(cè)定了寧波金柑、國(guó)慶1號(hào)和伏令夏橙二倍體和四倍體細(xì)胞周期。三個(gè)品種的二倍體細(xì)胞分裂高峰分別出現(xiàn)在繼代培養(yǎng)后第4d、6d、4d，細(xì)胞分裂指數(shù)分別為25.5±1.5％、25.3±0.6％、31.8±1.0％；而四倍體細(xì)胞分裂高峰分別出現(xiàn)在繼代培養(yǎng)后第6d、10d、4d細(xì)胞分裂指數(shù)分別為22.7±1.0％、21.2±1.2％、28.8±2.7％。 6、用2