走馬胎三萜皂苷類化合物的分離及Ag3的生物轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、走馬胎（Ardisia gigantifolia stapf）為紫金?？谱辖鹋僦参锏母稍锔o，具有祛風(fēng)濕壯筋骨、活血化瘀、止血生肌等功效[1]，主產(chǎn)于云南、廣西、廣東、江西、福建等地[2]。從本屬植物中發(fā)現(xiàn)越來越多的生物活性成分，特別是三萜皂苷具有顯著的抗腫瘤活性，對胃癌、肝癌、結(jié)腸癌、鼻咽癌、宮頸癌、肺癌、膀胱癌、胸腺癌等癌細(xì)胞均有抑制作用[3]。為研究走馬胎抗腫瘤活性成分特別是三萜皂苷類化合物，本研究重點(diǎn)分離、純化皂苷類物質(zhì)，共得

2、到6個已知的三萜皂苷類化合物，其中化合物Ag3的含量較高（1.1％）且對多種腫瘤細(xì)胞的增殖均有明顯的抑制作用。由于從植物中提取分離足夠量的活性單體皂苷進(jìn)行構(gòu)效關(guān)系研究有較大難度，所以本文采用生物轉(zhuǎn)化的方法來得到結(jié)構(gòu)多樣性的皂苷。即利用生物轉(zhuǎn)化的方法，選擇鏈格孢、燕麥曲霉為發(fā)酵菌株、化合物3β-O-{?-L-吡喃鼠李糖基-(1→3)-[β-D-吡喃木糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)]

3、-α-L-吡喃阿拉伯糖基}-西克拉敏A(簡稱為Ag3)為目標(biāo)底物，利用微生物轉(zhuǎn)化的方法得到5個轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，其中4個為新化合物。
　　已知化合物分別被鑒定為：3?-O-{α-L-吡喃鼠李糖基-(1→3)-[β-D-吡喃木糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)]-?-L-吡喃阿拉伯糖基}-西克拉敏 A(Ag3)；3β-O-{α-L-吡喃鼠李糖基-(1→3)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→

4、3)-β-D-吡喃木糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)]-α-L-吡喃阿拉伯糖基}-16β-羥基-13?,28-環(huán)氧-齊墩果烷（2）；lysikoianoside（3）；3β-O-{α-L-吡喃鼠李糖基-(1→3)-[β-D-吡喃木糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)]-α-L-吡喃阿拉伯糖基}-16α-羥基-13?,28-環(huán)氧-齊

5、墩果烷（4）；3?-O-{α-L-吡喃鼠李糖基-(1→3)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-β-D-吡喃木糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)]-α-L-吡喃阿拉伯糖基}-西克拉敏 A（5）；3β-O-{α-L-吡喃鼠李糖基-(1→3)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-β-D-吡喃木糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)]-α-

6、L-吡喃阿拉伯糖基}-16α-羥基-30-乙酰氧基-13,28-環(huán)氧-齊墩果烷（6）；3β-O-{α-L-吡喃鼠李糖基-(1→3)-[β-D-吡喃木糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)]-α-L-吡喃阿拉伯糖基}-16α-羥基-30-乙酰氧基-13,28-環(huán)氧-齊墩果烷（7）。
　　新化合物被鑒定為：3-O-{α-L-吡喃鼠李糖基-(1→3)-[β-D-吡喃木糖基-(1→2)]-

7、β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-α-L-吡喃阿拉伯糖基}-3β,16α,30-三羥基-13,28-環(huán)氧-齊墩果烷（8*）；3-O-{α-L-吡喃鼠李糖基-(1→3)-[β-D-吡喃木糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-α-L-吡喃阿拉伯糖基}-西克拉敏A（9*）；3-O-{α-L-吡喃鼠李糖基-(1→3)-[β-D-吡喃木糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)]-α-

8、L-吡喃阿拉伯糖基}-3β,16α,22α-三羥基-13,28-環(huán)氧-30-醛基-齊墩果烷(10*)；3-O-{α-L-吡喃鼠李糖基-(1→3)-[β-D-吡喃木糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)]-α-L-吡喃阿拉伯糖基}-3β,16α,22α-三羥基-13,28環(huán)氧-齊墩果烷（11*）。
　　運(yùn)用體外細(xì)胞計數(shù)法（CCK法），對分離得到的化合物Ag3、轉(zhuǎn)化產(chǎn)物化合物8、9、1

9、0、11進(jìn)行抗腫瘤藥理活性篩選，在肝癌細(xì)胞Bel-7402、HepG2、SMMC-7721和正常肝細(xì)胞L02模型上，全部化合物均顯示出較好的抗腫瘤活性；其中化合物8對HepG2的抑制作用優(yōu)于陽性藥表柔比星，也優(yōu)于底物 Ag3，毒性小于表柔比星，有應(yīng)用于臨床的可能性。因此進(jìn)一步考察了化合物8對HepG2肝癌細(xì)胞周期及凋亡的影響，研究結(jié)果表明，化合物8可損傷肝癌細(xì)胞的DNA，將細(xì)胞阻滯在S期，并且阻滯了蛋白質(zhì)和RNA的合成而進(jìn)一步誘導(dǎo)凋亡，

10、抑制細(xì)胞增殖，其具體的作用機(jī)制還需進(jìn)一步的深入研究。
　　本文還對上述化合物抗腫瘤的構(gòu)效關(guān)系進(jìn)行了初步的研究和分析，選取肝癌細(xì)胞HepG2，運(yùn)用CCK-8試劑盒將得到的11個化合物進(jìn)行體外抗腫瘤活性測試，發(fā)現(xiàn)化合物1、4、5、6、7、8、10、11均有較強(qiáng)的抑制腫瘤細(xì)胞增殖的活性，與陽性藥表柔比星相當(dāng)，提示抗腫瘤活性與糖鏈中糖的數(shù)量無明顯的關(guān)系；酸水解后的產(chǎn)物無活性[4]，表明13,28位的環(huán)氧醚橋結(jié)構(gòu)和30位基團(tuán)可能為抗腫瘤活性