三種中草藥中皂苷類化合物的液質(zhì)聯(lián)用分析.pdf

1、本課題從六個(gè)方面闡述了皂苷類藥物有效成分的藥理作用，評(píng)述了目前皂苷類有效成分的提取分離技術(shù)，指出了不同提取方法的優(yōu)缺點(diǎn)，綜述了皂苷類有效成分的分析研究現(xiàn)狀，比較了不同檢測方法的特點(diǎn)，指出了目前檢測方法的不足。
　　 針對目前皂苷類藥物有效成分的檢測現(xiàn)狀，依據(jù)皂苷類藥物有效成分的結(jié)構(gòu)特征，本課題集高效能、高分辨的高效液相色譜分離技術(shù)與高靈敏度、高選擇性的質(zhì)譜檢測技術(shù)于一體，建立了三種中草藥中皂苷類化合物的高效液相色譜-電噴霧電離-

2、質(zhì)譜聯(lián)用(HPLC-ESI-MS/MS)分析方法，該法靈敏度高，選擇性好，可用于皂苷類中草藥的有效質(zhì)量監(jiān)控。
　　 本課題詳細(xì)考察了三種中草藥中皂苷類化合物的色譜分離及質(zhì)譜分析檢測的最佳條件。通過對固定相、流動(dòng)相、柱溫和流速的研究，優(yōu)化了色譜分離條件。通過對離子化模式、噴霧針電壓、干燥氣溫度、干燥氣壓力、毛細(xì)管電壓和碰撞能量的研究，得到了最佳的質(zhì)譜條件，最終建立的相應(yīng)皂苷類化合物分離分析方法如下:
　　 (1)柴胡皂苷的

3、研究。目的:建立高效液相色譜-電噴霧離子-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)同時(shí)測定柴胡中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的新方法。方法:實(shí)驗(yàn)采用Ultimate(R) XB-C8色譜柱(150mm×2.1mm，3μm)，流動(dòng)相:0.1％甲酸水溶液-CH3CN，梯度洗脫;流速:0.2mL·min1;柱溫:35℃;質(zhì)譜條件為:電噴霧電離源(ESI);負(fù)離子掃描;選擇性反應(yīng)監(jiān)測(SRM)模式;噴霧針電壓:-4500V;干燥氣溫度:350℃;干燥氣壓力:22psi;碰撞氣(

4、Ar)壓力:1.8mT。結(jié)果:在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，柴胡皂苷a和d達(dá)到了基線分離。在負(fù)離子模式下，根據(jù)化合物準(zhǔn)分子離子峰和碎片離子峰，鑒定了化合物的結(jié)構(gòu)。其中，準(zhǔn)分子離子峰均為[M-H]-m/z=779，定量離子峰均為[M-H-Glc]-m/z=617，在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，柴胡皂苷a和d分別在0.05～5.0mg·L-1和0.05～10.0mg·L-1范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，柴胡皂苷a和d的回歸方程和相關(guān)系數(shù)分別為:A=1.3

5、1×105c-3.9×104，r=0.9994; A=1.34×105c-1.9×104，r=0.9992，檢出限分別為15ng·mL-1(a)和12ng·mL1(d)，加標(biāo)回收率分別為99.3％和99.8％。結(jié)論:該法操作簡便、選擇性強(qiáng)、靈敏度高，可用于柴胡藥材及制劑中柴胡皂苷類化合物的質(zhì)量控制。
　　 (2)知母皂苷的研究。目的:建立高效液相色譜-電噴霧離子-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)同時(shí)檢測知母中知母皂苷AⅢ和知母皂苷BⅡ兩種活性成分的

6、新方法。方法:實(shí)驗(yàn)采用Ultimate(R)XB-C8色譜柱(150mm×2.1mm，3μm)，流動(dòng)相:0.05％甲酸水溶液-CH3CN，梯度洗脫，流速:0.2mL·min-1，柱溫:35℃;質(zhì)譜條件:電噴霧電離源(ESI);負(fù)離子掃描;多反應(yīng)監(jiān)測模式(MRM);噴霧針電壓:-5000V;干燥氣溫度:350℃;干燥氣壓力:25psi;碰撞氣(Ar)壓力:1.8mT。結(jié)果:在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，知母皂苷AⅢ和BⅡ達(dá)到了基線分離。在負(fù)離子模式下

7、根據(jù)化合物準(zhǔn)分子離子峰和碎片離子峰，鑒定了化合物的結(jié)構(gòu)。其中，準(zhǔn)分子離子峰依次為[M-H]-m/z=739(AⅢ)和[M-H]-m/z=919(BⅡ)，碎片離子峰依次為[M-H-Glc]-m/z=577(AⅢ)和[M-H-Glc]-m/z=757(BⅡ)。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，知母皂苷AⅢ在0.01～10.0mg·L-1范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，回歸方程和相關(guān)系數(shù)分別為:A=2.01×107c+2.0×106，r=0.9996

8、，檢出限為6ng·mL-1，加標(biāo)回收率為99.2％。知母皂苷BⅡ在0.01～10.0mg·L-1范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，回歸方程和相關(guān)系數(shù)分別為:A=6.03×106c+3.4×105，r=0.9993，檢出限為2ng·mL-1，加標(biāo)回收率為98.9％。結(jié)論:該法操作簡便，選擇性強(qiáng)、靈敏度高，可用于知母藥材及制劑中知母皂苷類化合物的質(zhì)量監(jiān)控。
　　 (3)黃芪皂苷的研究。目的:建立高效液相色譜-電噴霧離子-質(zhì)譜聯(lián)

9、技術(shù)同時(shí)檢測黃芪中黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ和黃芪皂苷Ⅳ三種活性化合物的新方法。方法:實(shí)驗(yàn)采用Ultimate(R) XB-C8色譜柱(150mm×2.1mm，3μm)，流動(dòng)相:0.5％甲酸水溶液-CH3CN，梯度洗脫;流速:0.2mL·min-1;柱溫:35℃;質(zhì)譜條件:電噴霧電離源(ESI);負(fù)離子掃描;多反應(yīng)監(jiān)測模式(MRM)和選擇離子監(jiān)測模式(SIM)并用;噴霧針電壓:-5000V;干燥氣溫度:320℃;干燥氣壓力:25psi;碰撞

10、氣(Ar)壓力:1.8mT。結(jié)果:在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ和黃芪皂苷Ⅳ實(shí)現(xiàn)了基線分離。在負(fù)離子模式下根據(jù)化合物準(zhǔn)分子離子峰和碎片離子峰，鑒定了化合物的結(jié)構(gòu)。其中，準(zhǔn)分子離子峰依次為[M+HCOO]-m/z=913(Ⅰ)，[M+HCOO]-m/z=871(Ⅱ)和[M+HCOO]-m/z=829(Ⅳ)。碎片離子峰依次為[M-H]-m/z=867(Ⅰ)，[M-H]-m/z=825(Ⅱ)和[M-H]-m/z=783(Ⅳ)。在最佳

11、實(shí)驗(yàn)條件下，黃芪皂苷Ⅰ在0.01～30.0mg·L-1范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，回歸方程和相關(guān)系數(shù)分別為:A=1.04×105c+3.1×104，r=0.9969，檢出限為3ng·mL-1，加標(biāo)回收率為99.2％。黃芪皂苷Ⅱ和Ⅳ均在0.01～10.0mg·L-1范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，回歸方程和相關(guān)系數(shù)分別為:A=1.71×105c-2.1×104，r=0.9996; A=3.81×105c-1.9×103