沃特曼內(nèi)酯類化合物的生物轉(zhuǎn)化及其活性評價.pdf

1、寄生性蠕蟲和宿主之間的呼吸鏈存在較大差異，寄生性蠕蟲為適應宿主體內(nèi)的低氧環(huán)境，采用厭氧呼吸鏈(NFRD-fumarate還原酶，簡稱NFRD)進行電子傳遞。而哺乳動物不具有該酶系，因此厭氧呼吸鏈可以作為抗寄生性蠕蟲藥物研發(fā)的新靶標。同時厭氧呼吸鏈抑制劑可以通過抑制其活性選擇性殺死腫瘤細胞DLD-1（人結(jié)直腸腺癌上皮細胞株）和Panc-1（人胰腺癌細胞株），因此厭氧呼吸鏈抑制劑也是潛在的抗腫瘤的藥物。
　　沃特曼內(nèi)酯類化合物是從鄔氏

2、黃絲曲霉中分離得到的一類化合物，同已報道的厭氧呼吸鏈抑制劑Ukulactones具有一定的結(jié)構(gòu)類似性。本研究首先以沃特曼內(nèi)酯F為底物，使用12株海洋真菌對其進行生物轉(zhuǎn)化。12株真菌均能將沃特曼內(nèi)酯F轉(zhuǎn)化為其結(jié)構(gòu)類似物;但效率不同，其中DL1103的轉(zhuǎn)化率最高，為10.7％;對其進行了分子水平的菌種鑒定，PCR產(chǎn)物為562 bp，經(jīng)BLAST序列對比表明其同Aspergillus sp.nov.F1的同源性達到100％;對其進行了生物轉(zhuǎn)化

3、的放大實驗，并對其轉(zhuǎn)化產(chǎn)物進行了分離純化。
　　其次，建立了抗蠕蟲活性評價體系。主要建成的模型包括厭氧呼吸鏈體系的NFRD酶系及其組成酶ComplexⅠ、好氧呼吸鏈體系的NADH氧化酶及其組成酶ComplexⅠ和ComplexⅡ，共5個篩選模型。確定了各種模型的最佳反應條件，其中厭氧呼吸鏈體系中NFRD酶系為37℃，pH7.2，350μM NADH，酶濃度為120μg/ml（厭氧環(huán)境）;其ComplexⅠ為pH7.2，0.32 m

4、M RQ，0.35 mM NADH，酶濃度為160μg/ml;好氧呼吸鏈的NADH氧化酶的最佳反應條件為37℃，pH6.8，350μM NADH，酶濃度為20μg/ml;其ComplexⅠ為pH6.8,0.74 mM DCIP,0.35 mM NADH,0.135 mM UQ和1 mM AntimycinA，酶濃度為45μg/ml;其ComplexⅡ為pH6.8，0.74 mM DCIP，0.35 mM Sodium succinate

5、，0.135 mM UQ和1 mM Antimycin A，酶濃度為45μg/ml。NFRD模型通過制造厭氧條件等條件的優(yōu)化，解決了原方法可能活性評價不準確的問題。
　　在上述工作的基礎(chǔ)上測定了沃特曼內(nèi)酯E、F和轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的活性，結(jié)果顯示沃特曼內(nèi)酯E和F對NFRD的IC50分別約為0.57和0.63μM，對NFRD中ComplexⅠ的IC50分別約為0.56和0.51μM，對NADH氧化酶的IC50＞100μM，對NADH氧化酶Co