超聲血管回聲跟蹤技術(shù)評價兔動脈粥樣硬化血管彈性的實驗研究.pdf

1、本文應(yīng)用超聲血管回聲跟蹤技術(shù)評價動脈粥樣硬化兔彈性動脈和肌性動脈在高脂喂養(yǎng)的不同時期血管彈性和內(nèi)皮功能的變化特點以及二者之間的相關(guān)關(guān)系，同時進行病理光鏡觀察，以期為超聲評價血管彈性和內(nèi)皮功能提供形態(tài)學上的依據(jù)，以及評價辛伐他汀對動脈粥樣硬化兔血管彈性和內(nèi)皮功能干預(yù)效果以及其對血管壁誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)、內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表達的效用。 研究材料與方法： 1、國產(chǎn)純種大耳白兔6只，體重2.5±0.5

2、g，喂普通顆粒飼料。右側(cè)股動脈近端穿刺，連接有創(chuàng)測壓模塊監(jiān)護儀，監(jiān)測血壓和心率的同時，同時做為體外注入藥物的渠道。應(yīng)用日本ALOKA Prosound α-10彩超儀，選擇股動脈上中段作為取樣區(qū)，選擇頻率為13MHz的高頻線陣探頭檢測并顯示股動脈長軸，使聲束與動脈壁垂直，獲得動脈內(nèi)徑最大和最佳圖像時，啟動ET軟件操作界面和分析系統(tǒng)，調(diào)至B/M模式，將取樣門分別置于股動脈前壁和后壁的中-外膜交界處，在股動脈注入L-NMMA、ACH、GTN

3、后，機器自動顯示股動脈血管彈性指標β、Ep、AC、PWVβ的測值。 2、國產(chǎn)純種大耳白兔24只，重2.5g±0.5g，隨機分成4組，正常對照組(A組)6只和高脂組(B組)18只，其中高脂組又分為喂養(yǎng)4周組6只、8周組6只、12周組6只。A組喂普通顆粒飼料，B組全天飼以高脂飼料，高脂飼料為10％蛋黃粉、5％大油、1％膽固醇與84％普通飼料混合。應(yīng)用ALOKA Prosound α-10彩色超聲診斷儀，探頭頻率13MHz。右側(cè)股動脈

4、近端穿刺，連接有創(chuàng)測壓模塊監(jiān)護儀，作用同前述。超聲觀察高脂喂養(yǎng)不同時期兔內(nèi)皮功能與腹主動脈、股動脈的血管彈性，內(nèi)皮功能包括內(nèi)皮依賴性舒張功能(EDD)和非內(nèi)皮依賴性舒張功能(NEDD)，于心電圖T波末測定其內(nèi)徑(D)，D為前后壁內(nèi)膜管腔界面間的垂直距離，先測量基礎(chǔ)內(nèi)徑(D<,0>)，隨后測量滴注ACH后的血管最大內(nèi)徑(D<,1>)，滴注GTN后的血管最大內(nèi)徑(D<,2>)，(EDD)：EDD=(D<,1>-D<,0>)/D<,0>×10

5、0％，NEDD=(D<,2>-D<,0>)/D<,0>×100％。血管彈性操作方法及指標同前述。酶法測血清總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-c)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)。并同期進行了腹主動脈和股動脈的甲醛固定、組織切片、HE染色、光鏡觀察。 3、國產(chǎn)純種大耳白兔42只，體重2.5g±0.5g，隨機分成3組，正常對照組(A組)6只、高脂組(B組)18只、干預(yù)組(C組)6只。A組喂普通顆粒飼料

6、，B組全天飼以高脂飼料，高脂飼料為10％蛋黃粉、5％大油、1％膽固醇與84％普通飼料混合，C組喂飼高脂飼料4周后加服辛伐他汀10mg/kg。應(yīng)用ALOKAProsound α-10彩色超聲診斷儀，探頭頻率13MHz。右側(cè)股動脈近端穿刺，連接有創(chuàng)測壓模塊監(jiān)護儀，作用同前述。超聲檢測各組兔不同喂養(yǎng)時期的血管內(nèi)皮功能和血管彈性，方法同前述。酶法檢測TC、TG、：HDL-C、LDL-C。應(yīng)用抗兔iNOS、eNOS多克隆抗體，采用ABC免疫組化方

7、法觀察腹主動脈和股動脈iNOS、eNOS蛋白的表達。 實驗結(jié)果： 1、將L．NMMA注入正常兔股動脈的遠端和近端后，均未影響收縮壓、舒張壓、平均動脈壓和心率(P>0.05)。將L-NMMA注入兔股動脈近端后，股動脈近端的血管彈性較靜息時減低(P<0.05)。單獨注入ACH后股動脈彈性較靜息時明顯增強(P<0.05)，將L-NMMA和ACH同時注入后，股動脈彈性和靜息時比較無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。單獨注入GTN至股動

8、脈近端后，其彈性指標測值較靜息時提高(P<0.05)，將L-NMMA和GTN同時注入股動脈近端后，其彈性指標測值亦較靜息時提高(P<0.05)。 2、高脂喂養(yǎng)兔第4周，TC、LDL-C明顯升高，HDL-C明顯減低，具有統(tǒng)計學意義。高脂組內(nèi)皮依賴性舒張功能障礙于喂養(yǎng)第4周即可出現(xiàn)，內(nèi)皮非依賴性舒張功能障礙于喂養(yǎng)第12周即可出現(xiàn)。高脂喂養(yǎng)組第12周兔腹主動脈開始血管彈性減低(P<0.05)。高脂喂養(yǎng)組第4周兔股動脈血管彈性即出現(xiàn)異常

9、，隨著喂養(yǎng)時間的延長，彈性呈現(xiàn)漸進性減低(P<0.05)。高脂喂養(yǎng)第4周組兔內(nèi)皮依賴性舒張功能與腹主動脈彈性不相關(guān)(P>0.05)，與股動脈彈性相關(guān)(P<0.05)。高脂喂養(yǎng)第4周時無光鏡改變，8周時出現(xiàn)光鏡改變，12周改變進一步加重，血管壁iNOS、eNOS蛋白表達增多。 3、辛伐他汀干預(yù)后治療組血脂水平、EDD、NEDD、腹主動脈彈性、股動脈彈性均較AS組提高(P<0.05)。光鏡觀察治療組動脈病變較AS組明顯減輕，血管壁i

10、NOS、eNOS蛋白表達減少。 研究結(jié)論： 1、基礎(chǔ)狀態(tài)下NO可對股動脈(肌性動脈)的擴張性進行調(diào)節(jié)。激發(fā)狀態(tài)下(即注入乙酰膽堿和硝酸甘油后)NO可對股動脈(肌性動脈)擴張性進行調(diào)節(jié)。乙酰膽堿對大動脈的作用主要基于NO的效應(yīng)。 2、高脂兔內(nèi)皮依賴性舒張功能損害出現(xiàn)在非內(nèi)皮依賴性舒張功能損害之前。高脂兔股動脈(肌性動脈)彈性減低出現(xiàn)在病理光鏡下形態(tài)學改變之前。高脂兔腹主動脈(彈性動脈)彈性減低出現(xiàn)在病理光鏡下形態(tài)學