動脈粥樣硬化兔血管內(nèi)皮功能損傷的超聲檢測價值.pdf

1、血管內(nèi)皮功能障礙是動脈粥樣硬化(AS)病理過程的一個早期全身性改變。不僅可以損害大中型動脈內(nèi)皮功能也能損害微血管內(nèi)皮功能，早期發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)皮功能的異常，尋找損害內(nèi)皮功能的各種危險因素及防治策略，動態(tài)觀察藥物干預(yù)對內(nèi)皮功能的影響，這無疑對于防止和延緩動脈粥樣硬化的發(fā)生有著極為重要的意義。本研究應(yīng)用高分辨率超聲檢測AS不同時期兔髂外動脈(EIA)內(nèi)皮功能，同期進行EIA的電鏡及光鏡的病理學(xué)觀察，以期為超聲評價內(nèi)皮功能的方法提供形態(tài)學(xué)上的依據(jù)，

2、并評價辛伐他汀對AS兔血管內(nèi)皮功能的影響及其與VCAM-1表達的關(guān)系，探討應(yīng)用高分辨率超聲評價藥物療效的可行性。應(yīng)用心肌聲學(xué)造影(MCE)、以AS兔為模型、自制聲學(xué)造影劑，以時間-強度曲線參數(shù)比率為心肌微血管內(nèi)皮功能的指標(biāo)，探討該方法的可行性以及兔AS過程中心肌微血管內(nèi)皮功能的變化。 方法：1.日本大耳白兔24只，1.75-2.25kg，隨機分為對照組(6只)和AS模型4周組、8周組、12周組，每組6只。對照組喂普通顆粒飼料，動

3、脈粥樣硬化組每日每只喂2g膽固醇。應(yīng)用Hp5500彩色超聲診斷儀，探頭頻率3-11MHz，檢查條件選“下肢動脈”設(shè)置，檢測不同AS時期兔左髂外動脈(LE-IA)的血管內(nèi)皮依賴性舒張功能(EDD)和血管內(nèi)皮非依賴性舒張功能(NEDD)，其中EDD=(D1-D0)/D0×100％；NEDD=(D2-D0)/D0×100％，D0為LEIA基礎(chǔ)狀態(tài)內(nèi)徑，加壓放氣后內(nèi)徑為D1，滴服硝酸甘油后內(nèi)徑為D2。對照組及4周組、8周組、12周組兔處死前采靜

4、脈血，用酶法在全自動生化分析儀上測血清總膽固醇(代)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)。并同期進行了LEIA甲醛固定、組織切片、HE染色、光鏡觀察及戊二醛固定、超薄切片、染色后電鏡觀察。并對超聲檢測血管內(nèi)皮功能的方法進行重復(fù)性檢驗。 2.日本大耳白兔26只，2.05-2.40kg，隨機分為3組：A組，對照組(6只)，喂正常顆粒飼料；B組，動脈粥樣硬化模型組(10只)，每日每只喂

5、2g膽固醇；C組，辛伐他汀治療組(10只)，每日每只喂2g膽固醇4周后加喂辛伐他汀10mg/kg，喂養(yǎng)至12周。超聲檢測不同時期兩組兔的EDD和NEDD(方法同前)，并同期進行了相關(guān)的血脂測定、病理學(xué)檢查。同時采用ABC法，應(yīng)用抗兔VCAM-1多克隆抗體(武漢博士德生物工程有限公司提供，1：200稀釋)用免疫組化方法檢測兔主動脈VCAM-1表達。胞膜或胞漿處有棕黃色或棕褐色顆粒狀物質(zhì)，呈網(wǎng)格狀或環(huán)狀沉淀者為陽性細胞。在高倍顯微鏡下(10

6、×40倍)任選5個視野進行陽性細胞百分數(shù)計數(shù)，求平均值。 3.日本大耳白兔20只，1.80-2.50kg。每日每只喂2g膽固醇喂養(yǎng)至12周。將白蛋白、右旋醣酐按一定比例混合，用超聲波細胞粉碎機探頭振蕩，在振蕩的過程中勻速向液體內(nèi)注人C3F8氣體，制備聲學(xué)造影劑。微泡濃度為2.9×109個/ml，大小為(2.8±0.76)μm。分別于喂養(yǎng)0周、4周、8周、12周，使用Hp5500型超聲超聲診斷儀，S4心臟探頭，應(yīng)用“contras

7、t”程序，經(jīng)耳緣靜脈注射造影劑行MCE，自動擬合出心肌視頻密度時間-強度曲線，計算出峰值聲強度(PI)、曲線下面積(AUC)、峰強度減半時間(HT)、及平均通過時間(MTT)。以注射ACH和NG后與注射前PI及AUC比值(PIR和AUCR)分別表示微血管EDD和NEDD。同時進行血脂測定，主動脈HE染色光鏡觀察、冠狀動脈左前降支冰凍切片蘇丹Ⅲ、Ⅳ混合染色光鏡觀察。 實驗結(jié)果：1.隨著膽固醇喂養(yǎng)周數(shù)的延長，血脂TC、HDL-C、L

8、DL-C逐漸升高，組間有顯著差異(P＜0.05，P＜0.01)。LEIA基態(tài)內(nèi)徑逐漸增加，LEIA的EDD逐漸減低，組間有顯著差異(P＜0.01)，NEDD在12周后才出現(xiàn)損傷，4周時無光鏡改變但伴隨電鏡改變，8周時出現(xiàn)光鏡改變，電鏡改變加重，12周光鏡及電鏡下改變均進一步加重。 2.AS模型組血脂逐漸升高，EDD逐漸減低，NEDD12周出現(xiàn)損傷，VCAM-1廣泛表達于內(nèi)膜及平滑肌細胞，陽性細胞面積的百分比為(30.12±9.9

9、5)％。辛伐他汀干預(yù)后治療組血脂水平較AS模型組明顯減低(P＜0.05，P＜0.01)，EDD較AS組明顯改善(P＜0.01)，NEDD12W與AS組亦有顯著差異(P＜0.01)，肉眼觀察及光鏡觀察治療組動脈病變較AS組明顯減輕，VCAM-1僅在內(nèi)膜及內(nèi)皮細胞表達，陽性細胞面積的百分比為(19.93±6.69)％。而正常對照組內(nèi)皮細胞表面僅有少量棕黃色顆粒分布。 3.經(jīng)胸探查在活體兔應(yīng)用自制心肌聲學(xué)造影劑可以獲得滿意MCE圖像。

10、在兔AS模型上應(yīng)用MCE聲學(xué)密度定量技術(shù)定量分析心肌微血管EDD和NEDD的改變，0周注射ACH后PI及AUC不同程度增高。4周增高程度明顯下降(P＜0.01)，而8周及12周均較注射前減低(P＜0.01)。注射NG后各時間段PI及AUC均增高，4周及8周PIR及AUCR與0周相比無顯著差異，12周PIR及AUCR與0周相比，差異有顯著性(P＜0.05，P＜0.01)。AS心肌微血管EDD是減低的，且隨AS的進程而逐漸加重，各時間段有顯

11、著性差異(P＜0.01)而NEDD在12周時出現(xiàn)減低。 結(jié)論：1.AS是一種形態(tài)和功能損害共存的病變，出現(xiàn)功能損害時在超微形態(tài)上的改變已存在，EDD的損傷出現(xiàn)早于NEDD損傷，高分辨率超聲所檢測的內(nèi)皮功能損傷進程與血管病理改變是相對應(yīng)的。超聲技術(shù)是評價血管內(nèi)皮功能的有效方法。 2.辛伐他汀可以保護內(nèi)皮功能、抑制VCAM-1的表達從而減輕AS病變程度。高分辨率超聲是評價藥物對內(nèi)皮功能影響的良好方法。 3.經(jīng)胸探查在