人胚胎血管內(nèi)皮祖細(xì)胞治療動脈粥樣硬化的初步研究.pdf

1、目的：
　　 研究人胚胎血管內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells，EPCs)分離、培養(yǎng)及鑒定的方法，評價(jià)其用于治療動脈粥樣硬化的可行性，為干細(xì)胞技術(shù)治療疾病提供可靠的細(xì)胞來源。
　　 方法：
　　 1．從8-14周齡流產(chǎn)的人胚胎主動脈中應(yīng)用膠原酶消化法分離獲得EPCs，用含有堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、表皮生長因

2、子(epidermal growth factor,EGF)和白血病抑制因子(leucocyte inhibitory factor,LIF)的低血清培養(yǎng)基體外擴(kuò)增培養(yǎng)EPCs。分離培養(yǎng)的EPCs鑒定采用細(xì)胞免疫熒光染色、RT-PCR及流式細(xì)胞術(shù)，檢測EPCs細(xì)胞的特異標(biāo)志CD133、CD34和血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體2（vascular endothelial growth factor receptor 2，VEGFR2）。培養(yǎng)的E

3、PCs應(yīng)用VEGF進(jìn)行誘導(dǎo)分化，并評價(jià)其分化成為血管內(nèi)皮細(xì)胞的能力。
　　 2．將用綠色熒光蛋白（green fluorescent protein，GFP）標(biāo)記的EPCs通過尾靜脈移植到apoE基因敲除小鼠動脈粥樣硬化模型中，24h后取出小鼠主動脈，鏡下觀察動脈粥樣硬化病變內(nèi)膜EPCs的定位粘附情況。
　　 結(jié)果：
　　 1．分離的人胚胎主動脈EPCs表達(dá)EPCs的標(biāo)志分子CD133，CD34和VEGFR2。E

4、PCs在體外特定低血清培養(yǎng)條件下表現(xiàn)很強(qiáng)的增殖能力，并具有攝取Ac-LDL和體外成管能力。培養(yǎng)的EPCs經(jīng)過VEGF誘導(dǎo)后，細(xì)胞表達(dá)CD133明顯降低，表達(dá)vWF，CD31和ELAM-1增強(qiáng)，表明細(xì)胞分化成為血管內(nèi)皮細(xì)胞。
　　 2．成功構(gòu)建動脈粥樣硬化模型，并在此動脈粥樣硬化模型中，檢測到有人胚胎主動脈EPCs定位并粘附到粥樣硬化病變內(nèi)膜。
　　 結(jié)論：
　　 人胚胎早期主動脈的EPCs具有很好的體外自我更新能