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文檔簡介
1、目的:腫瘤干細胞理論的提出為認識腫瘤提供了新的思路,越來越多的腫瘤干細胞已經(jīng)得到分離和鑒定;本文旨在應用無血清培養(yǎng)基分離胰腺癌細胞球,并檢測其miR-590-3p的表達。
方法:運用無血清培養(yǎng)基克隆培養(yǎng)ASPC-1,PANC-1細胞,檢測其自我更新及分化、細胞周期、侵襲實驗、成瘤能力和表面標記物CD24/CD44表達等,驗證其腫瘤干細胞特性。熒光定量PCR技術(qRT-PCR)檢測miR-590-3p在胰腺癌細胞球中的表達
2、。
結果:少量ASPC-1和PANC-1細胞在無血清培養(yǎng)基中能存活,呈克隆球樣懸浮生長,并可以在體外連續(xù)傳代,加入血清后細胞球帖壁分化。ASPC-1,PANC-1細胞球G0/G1期分別為(75.3±5.4)%,(80.1±4.7)%;ASPC-1和PANC-1細胞球的平均穿膜細胞數(shù)分別為147.3±18.6,113.2±12.9個,較細胞系具有較強的侵襲能力;ASPC-1和PANC-1細胞球移植形成腫瘤所需最少細胞數(shù)為5×
3、10 5個,其成瘤能力是普通細胞系的100倍;ASPC-1,PANC-1細胞球CD24+CD44+比例分別為0.38%-0.43%,4.91%-5.21%,高于細胞系中的表達(P<0.05);ASPC-1,PANC-1細胞球miR-590-3p表達分別是細胞系的4.67,4.52倍(P<0.05)。
結論:應用無血清培養(yǎng)基可以從ASPC-1,PANC-1細胞系中分離出具有干細胞特性的胰腺癌細胞球,其miR-590-3p表達
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