MiR-34c、MiR-21、MiR-16、MiR-10b、MiR-200a、MiR-148b、MiR-Let-7i在原發(fā)性肝癌組織和癌旁組織間的差異表達(dá)及與血清腫瘤標(biāo)志物水平的相關(guān)性研究.pdf

1、引言
　　miRNAs（microRNAs）是一類近年研究發(fā)現(xiàn)的短序列、非編碼、具有調(diào)控功能的小分子RNA，其在轉(zhuǎn)錄后水平對靶mRNAs進(jìn)行負(fù)性調(diào)控。miRNAs作為細(xì)胞內(nèi)重要的核酸調(diào)節(jié)分子，參與調(diào)控生物生長發(fā)育等重要的生命過程，并與眾多疾病發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，其中即包括腫瘤。
　　肝癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病原因和發(fā)病機制到目前為止尚未完全闡明，肝癌的發(fā)生是一個多因素參與的過程。研究表明miRNAs與癌基因和抑癌基因

2、的相互作用是包括肝癌在內(nèi)的惡性腫瘤形成的機制之一。miRNAs參與調(diào)控很多癌基因和抑癌基因，或者受到這些基因的調(diào)節(jié)，有些癌基因或者抑癌基因已經(jīng)明確為某一miRNA的靶作用分子。
　　目前，關(guān)于miRNAs在肝癌領(lǐng)域的研究主要集中于兩個方面：一方面為關(guān)于miRNAs差異表達(dá)譜的研究，其中包括肝癌細(xì)胞系miRNAs差異表達(dá)譜的研究，肝癌動物模型miRNAs差異表達(dá)譜的研究，臨床肝癌組織標(biāo)本以及肝炎、肝硬化組織標(biāo)本的miRNAs差異表達(dá)

3、譜的研究；另一方面為關(guān)于miRNAs靶基因和生理調(diào)節(jié)機制的研究。前者可為肝癌臨床診斷、治療和預(yù)后提供有關(guān)miRNAs的基礎(chǔ)信息，不同的研究機構(gòu)所獲得的差異表達(dá)譜不盡相同，后者則致力于揭示某一個或者幾個miRNAs的調(diào)節(jié)機制以及與疾病發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。
　　第四軍醫(yī)大學(xué)肝膽外科實驗室前期進(jìn)行了關(guān)于肝癌細(xì)胞系和胎肝細(xì)胞系miRNAs差異表達(dá)譜的實驗研究，建立了大鼠肝癌細(xì)胞和胎肝細(xì)胞之間miRNAs的表達(dá)差異譜，我們在此基礎(chǔ)上查閱有關(guān)文獻(xiàn)

4、，選取研究報道與腫瘤發(fā)生有密切關(guān)系的七種miRNAs（miR-10b、miR-21、miR-34c、miR-16、miR-let7i、miR-200a、miR-148b），探討該七種miRNAs在原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌中的差異表達(dá)情況。
　　目的
　　檢測MiR-34c、miR-21、miR-16、miR-10b、miR-200a、miR-148b及miR-Let-7i在原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌組織和癌旁組織中的表達(dá)水平，并對七種miRN

5、As在原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌組織和癌旁組織中的表達(dá)差異與腫瘤標(biāo)志物AFP、CEA、CA19-9、CA125的血清水平進(jìn)行相關(guān)性分析，探討肝癌診斷和預(yù)后可能的新標(biāo)志。
　　方法
　　(1)收集臨床肝癌患者癌組織標(biāo)本和癌旁組織標(biāo)本以及肝癌患者的血液標(biāo)本，整理收集患者病歷資料相關(guān)信息；
　　(2)用電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測肝癌患者的腫瘤標(biāo)志物AFP、CEA、CA19-9、CA125血清水平；
　　(3)使用Trizol法提取

6、肝癌組織和癌旁組織中的總RNA；
　　(4)瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢驗總RNA質(zhì)量；
　　(5)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)和實時定量PCR反應(yīng)檢測七種microRNAs在原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌組織和癌旁組織中的表達(dá)情況。
　　結(jié)果
　　(1)MiR-34c、miR-21、miR-16、miR-10b、miR-200a、miR-148b及miR-Let-7i在原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌組織和癌旁組織中的表達(dá)差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.

7、05)。
　　(2)與癌旁組織相比，MiR-34c、miR-21、miR-16及miR-10b在肝癌組織中表達(dá)上調(diào)，miR-200a、miR-148b及miR-Let-7i在肝癌組織中表達(dá)下調(diào)，其中miR-200a和miR-148b下調(diào)明顯。
　　(3)miR-200a在肝癌和癌旁組織中的表達(dá)差異與患者血清AFP水平具有正相關(guān)性(r=0.8489，P<0.01)，即miR-200a在肝癌組織中的下調(diào)程度（與癌旁組織比較），與

8、患者血清AFP水平呈正相關(guān)。
　　(4)其余六種microRNAs的表達(dá)差異與患者腫瘤標(biāo)志物AFP、CEA、CA19-9、CA125血清水平均無相關(guān)關(guān)系（P>0.05）。
　　結(jié)論
　　(1)MiR-34c、miR-21、miR-16、miR-10b、miR-200a、miR-148b及miR-Let-7i在原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌和癌旁組織中存在表達(dá)差異，其中MiR-34c、miR-21、miR-16、miR-10b表達(dá)上調(diào)