熒光原位雜交在9、17號(hào)染色體診斷膀胱癌中的應(yīng)用研究.pdf

1、目的：比較熒光原位雜交技術(shù)（FISH）和尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查在膀胱移行上皮癌診斷中的敏感性和特異性，評(píng)價(jià)：FISH技術(shù)在膀胱癌診斷中的應(yīng)用價(jià)值。
　　 方法：以河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院泌尿外科2008年4月至2008年12月共收治100例疑似膀胱移行上皮癌的血尿患者為研究對(duì)象，包括24例有膀胱移行細(xì)胞癌病史者和76例無(wú)膀胱癌病史者。正常對(duì)照20例。熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization，簡(jiǎn)稱(chēng)F

2、ISH）是一種應(yīng)用非放射性熒光物質(zhì)依靠核酸探針雜交原理在染色體上顯示DNA序列位置的方法，具有快速、無(wú)創(chuàng)性、敏感性高等優(yōu)點(diǎn)，在中期和間期細(xì)胞均可檢測(cè)DNA序列及其變化。這項(xiàng)技術(shù)廣泛應(yīng)用于腫瘤生物學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、基因定位、基因擴(kuò)增等領(lǐng)域。熒光原位雜交可以檢測(cè)到不同類(lèi)型的細(xì)胞遺傳學(xué)改變，包括染色體的復(fù)制、擴(kuò)增、缺失等。本研究中所用的FISH探針包括一種組合：GLP P16探針/CSP17探針，P16探針名稱(chēng)為細(xì)胞周期蛋白依賴(lài)性激酶抑制因子2

3、A；CSP17探針名稱(chēng)為17號(hào)染色體著絲粒。P16探針雜交到人類(lèi)9號(hào)染色體長(zhǎng)臂（9q21），覆蓋整個(gè)p16基因，熒光信號(hào)為紅色；對(duì)照探針為CSP17，探針雜交信號(hào)位于人類(lèi)17號(hào)染色體著絲粒（17p11.1-q11.1），覆蓋整個(gè)著絲粒區(qū)域，熒光信號(hào)為綠色。收集這100例疑似膀胱癌的血尿患者及20例不同年齡的正常人的120份尿液標(biāo)本，使用熒光標(biāo)記的17號(hào)染色體著絲粒及9q21區(qū)帶探針檢測(cè)尿液脫落上皮細(xì)胞的染色體異常。通過(guò)對(duì)20例不同年齡的

4、正常人的尿液進(jìn)行FISH檢測(cè)，并對(duì)9q21、17號(hào)染色體分別計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，統(tǒng)計(jì)出不同類(lèi)型異常情況細(xì)胞數(shù)目，并依此確立閾值。同時(shí)，對(duì)100例疑似膀胱癌的血尿患者行FISH檢測(cè)，采用上述方法對(duì)不同類(lèi)型異常情況細(xì)胞計(jì)數(shù)，分別與閾值做對(duì)比來(lái)確定染色體的異常。FISH檢測(cè)陽(yáng)性的標(biāo)準(zhǔn)是9q21、17號(hào)染色體均異?；蛞环N染色體同時(shí)存在缺失或增多。同時(shí)，對(duì)100例疑似膀胱癌的血尿患者的尿液行脫落細(xì)胞學(xué)檢查，細(xì)胞學(xué)檢查標(biāo)本與用于FISH檢測(cè)的標(biāo)本同一

5、天取，連續(xù)送3次。結(jié)果分為陽(yáng)性、陰性、可疑。細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果可疑但難以診斷為膀胱癌者，在計(jì)算敏感性時(shí)按陽(yáng)性處理。按膀胱癌的分期不同分別計(jì)數(shù)FISH及細(xì)胞學(xué)的陽(yáng)性例數(shù)，并用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法比較兩者對(duì)不同分期腫瘤的敏感性及總特異性。尿液標(biāo)本需要在膀胱鏡檢查前取，可疑病例要取活檢或切除，組織病理學(xué)診斷對(duì)腫瘤進(jìn)行分期。
　　 結(jié)果：共有93例患者被病理學(xué)診斷為膀胱或上尿路移行細(xì)胞癌。FISH對(duì)不同分期膀胱癌pTis/pTa（22例），pT1（5

6、2例），pT2（14例）和：pT3/pT4（5例）診斷的敏感性分別為54.55％，88.46％，92.86％和100％。脫落細(xì)胞學(xué)對(duì)不同分期膀胱癌pTis/pTa（22例），pT1（52例），pT2（14例）和pT3/pT4（5例）診斷的敏感性分別為22.72％，38.46％，78.57％和100％。對(duì)于pTis/pTa期膀胱癌（P=0.030），pT1期膀胱癌（P=0.001），pT2期膀胱癌（P=0.596），pT3/pT4期膀胱癌

7、（P>0.05）。FISH總體的敏感性為81.72％，細(xì)胞學(xué)的總體敏感性為44.09％（P=0.001），而FISH和細(xì)胞學(xué)的特異性分別為85.71％和100％（P=0.299）。
　　 結(jié)論：FISH用于檢測(cè)膀胱移行上皮癌的血尿患者敏感性明顯高于尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查，特異性無(wú)顯著差異。FISH技術(shù)能明顯改進(jìn)膀胱癌的診斷，對(duì)于膀胱癌的篩查有重要意義。此研究為中國(guó)人群膀胱癌非創(chuàng)傷性、高特異性、高敏感性的早期診斷方法的建立提供理論依據(jù)。