13170.b7h4靶向shrna干擾小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞c3h10t12的構(gòu)建及其生物學(xué)功能的初步研究

1、碩士專業(yè)學(xué)位論文論文題目B7H4靶向shRNA干擾小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞C3H10T12的構(gòu)建及其生物學(xué)功能的初步研究研究生姓名李楠指導(dǎo)教師姓名薛群專業(yè)名稱神經(jīng)病學(xué)研究方向神經(jīng)免疫論文提交日期2013年5月B7H4靶向shRNA干擾小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞系C3H10T12的構(gòu)建及其生物學(xué)功能的初步研究中文摘要IB7H4靶向shRNA干擾小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞系C3H10T12的構(gòu)建及其生物學(xué)功能的初步研究中文摘要目的：目的：構(gòu)建小鼠B7H4靶向shRNA

2、穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的鼠間充質(zhì)干細(xì)胞株C3H10T12(以下簡(jiǎn)稱C3H10)，通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)探討B(tài)7H4分子在C3H10細(xì)胞移植治療EAE中的免疫抑制作用。方法：方法：應(yīng)用流式細(xì)胞儀、Westernblot等方法檢測(cè)C3H10細(xì)胞中B7H4分子的表達(dá)情況；將裝載有小鼠B7H4分子小片段shRNA的慢病毒顆粒轉(zhuǎn)染C3H10細(xì)胞系(C3H10shRNAB7H4)；利用載體的嘌呤霉素抗性篩選轉(zhuǎn)染的C3H10細(xì)胞，通過熒光顯微鏡及流式細(xì)胞儀（FCM）檢測(cè)s

3、hRNA的轉(zhuǎn)染效率。通過流式細(xì)胞儀、RTPCR及Westernblot等方法檢測(cè)不同序列的特異性shRNA干擾C3H10細(xì)胞后B7H4分子的mRNA及蛋白表達(dá)水平，得到干擾效率較好的一株C3H10shRNAB7H4細(xì)胞，將其與小鼠脾臟淋巴細(xì)胞共同培養(yǎng)，用FCM檢測(cè)其對(duì)淋巴細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡的作用。建立EAE小鼠模型，分假手術(shù)組、造模組、C3H10細(xì)胞移植組、C3H10shRNANC細(xì)胞移植組、C3H10shRNAB7H4細(xì)胞移

4、植組，其中C3H10細(xì)胞移植組、C3H10shRNANC細(xì)胞（轉(zhuǎn)染了未含靶向分子的對(duì)照shRNA的C3H10)移植組、C3H10shRNAB7H4細(xì)胞（轉(zhuǎn)染了含靶向分子B7H4shRNA的C3H10)移植組在免疫后第8天分別將C3H10細(xì)胞、C3H10shRNANC細(xì)胞、C3H10shRNAB7H4細(xì)胞注入建立的EAE模型小鼠體內(nèi)，觀察各組小鼠的發(fā)病神經(jīng)功能評(píng)分及體重變化情況，與對(duì)照組相比較。結(jié)果：結(jié)果：FCM及Westernblot檢

5、測(cè)顯示C3H10細(xì)胞高表達(dá)B7H4分子；熒光顯微鏡及FCM檢測(cè)顯示shRNA轉(zhuǎn)染C3H10細(xì)胞的效率高達(dá)80%以上；通過嘌呤霉素篩選后得到的C3H10細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率在95%以上，且能穩(wěn)定傳代；有4對(duì)特異性shRNA對(duì)B7H4mRNA及蛋白均有不同程度的下調(diào)，其中以shRNA1對(duì)B7H4的下調(diào)作用最強(qiáng)，作為最佳特異性shRNA；C3H10能明顯抑制經(jīng)PHA激發(fā)的小鼠脾臟細(xì)胞的活化和增殖，使細(xì)胞周期阻滯于G0G1期，該免疫抑制效應(yīng)在PHA激發(fā)