歐洲七葉樹體細(xì)胞胚發(fā)生和植株再生研究.pdf

1、歐洲七葉樹是重要的園林綠化樹種,并具有重要的醫(yī)藥價(jià)值,國內(nèi)引種栽培有限,種苗供不應(yīng)求,通過細(xì)胞工程技術(shù)快速繁殖性狀優(yōu)良的再生植株,具有重要的應(yīng)用價(jià)值和理論意義.該文就歐洲七葉樹的組織培養(yǎng)和體細(xì)胞胚發(fā)生以及植株再生進(jìn)行了系統(tǒng)研究,主要結(jié)果如下:以植物細(xì)胞具有全能性的理論為依據(jù),以歐洲七葉樹幼嫩葉片為外植體,進(jìn)行體細(xì)胞胚胎發(fā)生研究,研究結(jié)果表明,誘導(dǎo)愈傷組織的適宜培養(yǎng)基是MS+2,4-D 2mg/L+KT0.2mg/L,MS+BA 8mg/

2、L+NAA 1mg/L有利于胚性愈傷組織的誘導(dǎo)和增殖,添加ZT 2mg/L或BA 5mg/L和IAA 0.2mg/L的MS培養(yǎng)基有利于體細(xì)胞胚發(fā)育和成熟,體細(xì)胞胚可直接誘導(dǎo)次生胚發(fā)生,MS+KT 0.1mg/L+NAA 0.01 mg/L或MS+ZT 0.1mg/L+NAA 0.01 mg/L培養(yǎng)基誘導(dǎo)效果最好,增殖頻率分別為214％、256％.以歐洲七葉樹體細(xì)胞胚的子葉為外植體,誘導(dǎo)次生胚發(fā)生或分化不定芽.結(jié)果表明,MS+ZT 0.5

3、~2mg/L+BA 1mg/L+IAA 0.2mg/L培養(yǎng)基可直接誘導(dǎo)體胚發(fā)生,誘導(dǎo)率超過80％;MS+BA 2mg/L+NAA 0.2 mg/L或MS+TDZ 0.01mg/L+NAA 0.2 mg/L培養(yǎng)基可直接分化不定芽,出芽誘導(dǎo)率分別為88％、100％.以歐洲七葉樹成熟種子的胚芽進(jìn)行離體培養(yǎng)和快速繁殖,結(jié)果表明:高約2cm的無菌苗在MS+0.6mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA或MS+0.4~0.6mg/L ZT+0.

4、1 mg/L NAA培養(yǎng)基上培養(yǎng)15 d左右可誘導(dǎo)出不定芽,分化頻率為100％,平均每株產(chǎn)芽35.7個(gè);MS+0.2mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+10mg/L AD培養(yǎng)基有利于芽伸長;生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.4 mg/L NAA+0.2mg/LIBA時(shí),生根率可達(dá)75％.通過組織細(xì)胞學(xué)方法研究體細(xì)胞胚的起源與發(fā)生部位,發(fā)現(xiàn)歐洲七葉樹體細(xì)胞胚為單細(xì)胞起源,外植體的表面及內(nèi)部都可以發(fā)生體細(xì)胞胚.胚性細(xì)胞多為橢圓形,細(xì)胞質(zhì)濃