棉花體細胞胚的再生及棉花遺傳轉化研究.pdf

1、目的：新疆是我國最大的棉花種植基地，質(zhì)量好，產(chǎn)量高，但是目前推廣的品種纖維品質(zhì)在國際市場上還沒有明顯的競爭優(yōu)勢，棉纖維品質(zhì)的改良已經(jīng)成為棉花育種工作面臨的攻關瓶頸。棉花再生體系建立存在很多困難，對基因型的依賴、體細胞胚發(fā)生率低、畸形苗比例高、周期偏長等原因都制約著轉基因育種的發(fā)展。探索生物技術育種新方法，特別是轉基因育種新方法對棉纖維的品質(zhì)改良具有重要的意義。
　　 方法：本實驗以新疆主栽品種新陸早33為研究對象，針對棉花轉基因

2、技術中遇到的體細胞胚胎發(fā)生頻率低，再生體系建立過程中畸形胚數(shù)量多和農(nóng)桿菌介導的棉花轉化過程中的影響因素進行研究。以下胚軸為外植體，通過愈傷組織的誘導、胚性愈傷組織的分化、胚狀體的萌發(fā)，各階段對不同激素的濃度組合進行實驗，完成對棉花胚性愈傷的誘導到體細胞胚胎發(fā)生階段的優(yōu)化；以棉花的下胚軸為受體，通過農(nóng)桿菌介導的方法進行遺傳轉化，誘導抗性愈傷組織，對所培養(yǎng)的愈傷組織進行基因組的提取和PCR檢測。
　　 結果與結論：研究證明有利于棉花

3、的愈傷組織生長的培養(yǎng)基是MSB培養(yǎng)基，激素濃度為KT 0.1 mg/L，2，4-D 0.1 mg/L，誘導率達到100％。挑選淡黃色的愈傷組織在MSB培養(yǎng)基，KON3加倍、高濃度的KT、低濃度IBA組合，以麥芽糖和葡萄糖為碳源進行試驗。結果表明：質(zhì)地疏松的顆粒狀愈傷組織容易進行分化培養(yǎng)，體細胞胚胎發(fā)生率高。選擇低鹽培養(yǎng)基，附加活性炭進行子葉胚的成苗，能夠減少畸形胚的數(shù)量，根的褐化程度降低，有利于成苗培養(yǎng)。建立高頻率的體細胞胚的誘導體系，