甘藍(lán)類蔬菜游離小孢子培養(yǎng)胚發(fā)生及其再生植株的研究.pdf

1、游離小孢子培養(yǎng)技術(shù)在作物遺傳育種上具有重要的應(yīng)用價(jià)值，通過(guò)該技術(shù)一方面可以快速獲得純合體，縮短育種年限，提高育種效率。另一方面，由小孢子培養(yǎng)獲得的胚狀體和再生植株還可以廣泛的應(yīng)用于構(gòu)建遺傳圖譜、基因定位、轉(zhuǎn)基因育種以及染色體工程等等。 胚胎發(fā)生能力和再生植株轉(zhuǎn)化率是游離小孢子培養(yǎng)技術(shù)的關(guān)鍵問(wèn)題。本試驗(yàn)選用60個(gè)結(jié)球甘藍(lán)品種，6個(gè)花椰菜品種，3個(gè)抱子甘藍(lán)品種和2個(gè)羽衣甘藍(lán)品種，分別進(jìn)行游離小孢子培養(yǎng)，篩選出16份有胚胎發(fā)生的材料；

2、選用其中胚胎發(fā)生能力較強(qiáng)的材料進(jìn)一步研究影響甘藍(lán)類蔬菜小孢子胚胎發(fā)生能力的因素，統(tǒng)計(jì)植株再生率，并對(duì)獲得的再生植株進(jìn)行倍性檢測(cè)和SRAP鑒定。結(jié)果如下 1.適于甘藍(lán)類蔬菜小孢子胚胎發(fā)生的小孢子發(fā)育階段位于單核晚期至雙核期，在結(jié)球甘藍(lán)培養(yǎng)過(guò)程中雙核期小孢子數(shù)目比例在50﹪左右為好。 2.培養(yǎng)基中蔗糖濃度為13﹪時(shí)可以誘導(dǎo)較多的基因型產(chǎn)生胚狀體，個(gè)別結(jié)球甘藍(lán)材料需要更高的蔗糖濃度。采用蔗糖濃度先高后低的稀釋培養(yǎng)法能夠提高啟動(dòng)

3、對(duì)稱分裂小孢子的數(shù)量和胚狀體的產(chǎn)量。NAA(0.05mg/L)加BA(0.1mg/L)的激素組合有利于小孢子的胚胎發(fā)生。活性炭對(duì)胚胎發(fā)生的促進(jìn)作用極其顯著。 3.誘導(dǎo)小孢子核第一次對(duì)稱分裂的溫度和時(shí)間為33℃24h。 4小孢子胚轉(zhuǎn)化再生植株率平均達(dá)到65.53﹪，不同基因型的植株再生率變化范圍在54.8﹪-70.3﹪之間。 5.運(yùn)用形態(tài)學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)方法檢測(cè)再生植株的倍性，發(fā)現(xiàn)甘藍(lán)類蔬菜具有較高的自然加倍能力，再