蘿卜游離小孢子培養(yǎng)技術(shù)研究.pdf

1、蘿卜(Raphanus sativus L.)為十字花科蘿卜屬一年生草本植物，是中國(guó)的重要蔬菜作物。近年來(lái)，隨著生產(chǎn)的發(fā)展和人們生活水平的提高，人們對(duì)蘿卜產(chǎn)量、抗性和產(chǎn)品品質(zhì)的要求越來(lái)越高，這就要求我們提高蘿卜育種效率、加速蘿卜的育種進(jìn)程。游離小孢子培養(yǎng)技術(shù)在作物遺傳育種上具有重要的作用，通過(guò)這項(xiàng)技術(shù)一方面可以迅速獲得純合具有抗病、抗蟲(chóng)、抗旱等特性的創(chuàng)新育種材料，縮短育種年限，提高育種效率；另一方面可以獲得雙單倍體(DH)群體，用于遺傳

2、分析、遺傳圖譜的構(gòu)建和分子標(biāo)記等基礎(chǔ)和應(yīng)用基礎(chǔ)研究。 在小孢子培養(yǎng)過(guò)程中，胚狀體的誘導(dǎo)因素及植株的再生條件是非常關(guān)鍵的問(wèn)題。所以，本試驗(yàn)針對(duì)蘿卜小孢子培養(yǎng)的頑拗性，選用不同的蘿卜種質(zhì)為試材，首先就花蕾的選取、預(yù)處理方式及培養(yǎng)條件對(duì)小孢子培養(yǎng)出胚的影響進(jìn)行研究，然后在再生培養(yǎng)基篩選的基礎(chǔ)上進(jìn)行胚狀體植株再生。主要研究結(jié)果如下： 1.通過(guò)對(duì)供試的4份蘿卜材料的花器官形態(tài)特征觀察，發(fā)現(xiàn)當(dāng)花蕾的縱徑在2.99～3.51mm之間，

3、花蕾的縱橫比在1.41～1.48之間，花瓣長(zhǎng)度在1.89～2.56mm之間，瓣藥比在0.92～1.06之間，小孢子處于適宜發(fā)育的單核靠邊期。觀察還發(fā)現(xiàn)，小孢子處于單核靠邊期的花蕾的其他外部特征是：花蕾飽滿，花藥呈現(xiàn)淺黃色至黃色，花藥被萼片包裹緊密，花瓣和花藥等長(zhǎng)或接近等長(zhǎng)。根據(jù)小孢子發(fā)育時(shí)期與花器官形態(tài)特征的關(guān)系，可以簡(jiǎn)便、迅速地選擇處于合適時(shí)期的花蕾。 2.研究了低溫、高溫、饑餓、甘露醇這4個(gè)因子對(duì)小孢子存活率的影響。對(duì)供試的

4、4份材料的花序的低溫預(yù)處理1d能保持小孢子的存活率，但隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)存活率直線下降。培養(yǎng)過(guò)程中的高溫預(yù)處理以2d能保持小孢子的存活率。試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)蘿卜小孢子不適宜饑餓處理，在有碳源存在的條件下，小孢子能保持較高的存活率。甘露醇的處理因基因型的不同表現(xiàn)不一致。 3.以培養(yǎng)過(guò)程中的4℃低溫處理時(shí)間、32.5℃熱激處理時(shí)間、NAA濃度、培養(yǎng)基類型、6-BA濃度、蔗糖濃度6個(gè)因素進(jìn)行正交設(shè)計(jì)，研究了16個(gè)處理組合的培養(yǎng)條件對(duì)22份蘿卜

5、材料小孢子出胚率的影響。共有9份材料出胚，其中有兩份材料獲得了再生植株。通過(guò)對(duì)不同試驗(yàn)材料影響主次因子排序，發(fā)現(xiàn)對(duì)不同材料都起劍顯著作用并排在前3位的因素有：4℃處理時(shí)間，32.5℃處理時(shí)間，蔗糖濃度。在此基礎(chǔ)上，獲得了蘿卜小孢子培養(yǎng)的優(yōu)化處理?xiàng)l件：32.5℃處理時(shí)間為2d，6-BA為0.1mg/L，NAA為1mg/L，蔗糖濃度為130g/L培養(yǎng)基類型為NLN。 4.由于蘿卜胚狀體再生較困難，以蘿卜胚芽為材料對(duì)再生培養(yǎng)基進(jìn)行了篩