結球甘藍和青花菜游離小孢子培養(yǎng)技術的優(yōu)化.pdf

1、結球甘藍(Brassica oleracea var.capitata、）和青花菜（Brassica oleracea var.italica）均屬于十字花科(Cruciferae)蕓薹屬(Brassica)二年生草本植物。二者均具有相當廣泛的自交不親和性，在雜交種親本系的常規(guī)選育中要多年蕾期自交。用常規(guī)方法進行田間育種，一般需要6～8代才能選育出理想的材料。通過游離小孢子培養(yǎng)得到的植株經染色體加倍后，能獲得遺傳上完全純合的后代。這不僅

2、可大大縮短雜交育種工作中自交系選育進程，而且對新品種的選育和種質資源的開發(fā)起到非常大的作用。
　　 目前國內外有很多關于游離小孢子培養(yǎng)的報道，技術也越來越成熟，但小孢子基因型間產胚率差異大及植株再生率低已成為實際應用當中的一大難題;另外，在進行倍性鑒定時，缺乏一種簡便、經濟、實用而又可靠的倍性鑒定方法。
　　 因此，本論文通過對選取的17份不同類型結球甘藍和10份不同類型青花菜雜種一代為試材，對影響小孢子產胚率和植株再生

3、率的因素、小孢子再生植株染色體倍性的鑒定、小孢子再生植株群體的自然加倍率和單倍體植株的人工加倍方法進行了研究。得出以下結果:
　　 1.在影響甘藍和青花菜游離小孢子胚胎誘導率的因素方面:
　　 (1)不同基因型材料最適花蕾長度有一定差異，結球甘藍和青花菜分別在3.5～4.5mm和3.0～3.5mm時，小孢子大多處于單核靠邊期，獲得的胚狀體最多;
　　 (2)不同基因型之間小孢子產胚率有很大差異;
　　 (

4、3)獲得高效小孢子胚狀體的溫度及培養(yǎng)基pH值最佳組合分別為:
　　 結球甘藍:33℃熱激2d+培養(yǎng)基pH6.2;
　　 青花菜:4℃低溫1d+33℃熱激1d+培養(yǎng)基pH6.2。
　　 (4)在提取液中加入8％甘露醇有助于結球甘藍和青花菜小孢子胚胎發(fā)生;
　　 (5)前期用17％的高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)2d后更換為新的13％蔗糖培養(yǎng)基對小孢子產胚率也有促進作用;
　　 (6)激素含量對小孢子胚狀體的誘導的作

5、用差異很大。NLN-13+0.05mg·L-16-BA+0.1g·L-1NAA有助于結球甘藍小孢子胚胎誘導;而1/2NLN-13培養(yǎng)基對青花菜小孢子胚胎發(fā)生率有促進作用。
　　 (7)預處理是小孢子培養(yǎng)成功的前提條件。試驗表明，低溫處理2d、8％甘露醇、適宜濃度的CH和秋水仙素都能提高結球甘藍小孢子的胚胎誘導率。
　　 2.在影響游離小孢子胚狀體再生成植株的因素方面:
　　 (1)7.0g·L-1瓊脂濃度的B5固

6、體培養(yǎng)基最適合小孢子胚狀體的萌發(fā)和植株再生，且子葉胚再生植株的頻率高于非子葉胚;
　　 (2)在固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)25d的子葉胚轉到再生培養(yǎng)基后成苗率較高;
　　 (3)培養(yǎng)基中加入4.0～5.0mg·L-1的AgNO3能有效解決胚狀體再生植株褐化、玻璃化等現象;
　　 3.通過對結球甘藍和青花菜小孢子再生植株的染色體倍性與氣孔保衛(wèi)細胞葉綠體數之間的相關性進行研究，得出孔保衛(wèi)細胞葉綠體數少于或等于10個的為單倍體，