蘿卜游離小孢子培養(yǎng)技術的研究.pdf

1、游離小孢子培養(yǎng)技術在植物育種以及相關的基礎研究中具有廣泛的應用前景。它是在花藥培養(yǎng)基礎上發(fā)展而來的一種單倍體誘導技術。蘿卜是我國栽培的第三大蔬菜作物，研究蘿卜游離小孢子培養(yǎng)對品種改良、加速育種進程具有重要意義。對蘿卜游離小孢子培養(yǎng)研究表明，蘿卜屬是十字花科作物中最不容易進行游離小孢子培養(yǎng)成功的材料之一。為了建立高效的蘿卜游離小孢子培養(yǎng)再生體系，本試驗對其進行了系統(tǒng)研究。主要研究了基因型、植株生長條件、花藥預處理、胚性小孢子選擇、培養(yǎng)基及

2、培養(yǎng)條件對蘿卜小孢子培養(yǎng)中胚胎發(fā)生及再生的影響。 通過研究得出如下結論： (1)基因型是限制蘿卜游離小孢子培養(yǎng)成胚的主要因素，在所研究的38個基因型中，共在9個基因型中獲得了胚狀體及再生苗，占全部材料的23.68％；這些基因型分屬于秋青、春白、心里美3種類型。 (2)植株生長條件影響蘿卜小孢子培養(yǎng)的成胚率，春季取材進行培養(yǎng)比冬季取材成胚率高。 (3)適合小孢子培養(yǎng)的時期為單核晚期，花蕾大小在2～4mm之間

3、，而且不同蘿卜品種適合培養(yǎng)的花蕾大小不同；正確地選擇適合胚胎發(fā)生能力高的小孢子是蘿卜游離小孢子培養(yǎng)得到小孢子胚的關鍵所在，即選擇胚性小孢子是小孢子培養(yǎng)成功的關鍵，試驗中發(fā)現(xiàn)利用Percoll密度梯度離心法分離胚性小孢子是有效的方法，蘿卜胚性小孢子主要集中在濃度為1.055g/cm<'3>和1.068 g/cm<'3>之間。 (4) 4z℃低溫條件下處理3天的小孢子可保持較高的存活率；培養(yǎng)基中添加活性炭、蔗糖可以提高蘿卜小孢子存活

4、率。 (5)花藥預處理可以提高成胚率：預處理對蘿卜游離小孢子培養(yǎng)的影響最大，是蘿卜游離小孢子成胚的關鍵因素，未經(jīng)預處理時38個基因型的蘿卜中，僅有4種基因型得到了胚狀體，占10.53％，經(jīng)對花藥進行不同的預處理后有9種基因型的蘿卜得到了小孢子胚，占23.68％，提高了13.15個百分點，并且以B<,5>培養(yǎng)基中添加甘露醇或秋水仙素對蘿卜花藥進行預處理效果更明顯，但不同的基因型對處理的時間及甘露醇、秋水仙素的濃度要求有差異。

5、 (6)培養(yǎng)條件也是影響蘿卜游離小孢子培養(yǎng)成功的重要因素，本試驗中33℃熱激24h或48h有利于蘿卜小孢子培養(yǎng)成胚。 (7)2,4-D、6-BA對蘿卜游離小孢子培養(yǎng)成胚有促進作用，但不是關鍵因素。 (8)發(fā)育正常的子葉期胚能夠成苗，成苗率達到100％，而畸形胚的成苗率僅有50％。 (9)本試驗篩選出蘿卜小孢子成苗培養(yǎng)基：B5-2+0.2mg/L6-BA+0.8％瓊脂；蘿卜小孢子苗生根培養(yǎng)基為：B5-2+0.2m