轉(zhuǎn)基因抗蟲棉安全性評價及分子生物學(xué)檢測體系建立的研究.pdf

1、國際上轉(zhuǎn)基因作物大規(guī)模發(fā)展,目前中國已經(jīng)產(chǎn)業(yè)化的轉(zhuǎn)基因作物主要是抗蟲棉.抗蟲棉的應(yīng)用和推廣為棉花生產(chǎn)帶來了巨大的社會和經(jīng)濟效益,但近年來隨著轉(zhuǎn)基因作物安全性問題的提出,轉(zhuǎn)基因棉花的安全性問題越來越多地引起了人們的關(guān)注.中國轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物的安全性評價體系已經(jīng)建立,并日趨完善.目前所系統(tǒng)申報的主要是轉(zhuǎn)基因抗蟲棉品種.該研究針對中國轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物安全性申報的要求,建立了轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的分子生物學(xué)檢測體系,是中國轉(zhuǎn)基因抗蟲棉產(chǎn)業(yè)化的基礎(chǔ)性研究,為轉(zhuǎn)基

2、因植物的分子檢測提供了一定依據(jù).研究結(jié)果如下:1)提出了一種新的提取棉花總DNA的方法——SDS結(jié)合CTAB法,有效克服了棉花富含酚、多糖等次生代謝物的困難,使所得棉花DNA純度高,OD260/OD280達到1.8,并提高了DNA產(chǎn)量,達到15ng/mg鮮葉.2)建立了快速鑒定中、美抗蟲棉的PCR體系及反應(yīng)條件,確定模板DNA的最佳量為50ng,最佳反應(yīng)條件為降落PCR:94℃預(yù)變性7min94℃ 45sec,65℃退火45sec,72

3、℃延伸1min,重復(fù)2個循環(huán);94℃ 45sec,63℃退火45sec,72℃延伸1min,重復(fù)2個循環(huán);94℃ 45sec,61℃退火45sec,72℃延伸1min,重復(fù)2個循環(huán);94℃ 45sec,59℃退火45sec,72℃延伸1min,重復(fù)2個循環(huán);94℃ 45sec,57℃退火45sec,72℃延伸1min,重復(fù)2個循環(huán);94℃ 45sec,55℃退火45sec,72℃延伸1min,重復(fù)2個循環(huán);94℃ 45sec,52℃退火

4、45sec,72℃延伸1min,重復(fù)24個循環(huán);72℃保溫7min.3)摸索出了DIG Southern雜交檢測GFM cry1A基因在抗蟲棉基因組中整合拷貝數(shù)的方法,確定棉花基因組用量為30 μ g.通過Southern雜交檢測到Bt殺蟲基因在8個單價轉(zhuǎn)基因抗蟲棉和5個雙價轉(zhuǎn)基因抗蟲棉基因組中整合的拷貝數(shù)為1至4.4)通過檢測抗蟲棉種植區(qū)內(nèi)其它植物基因組中無外源GFM cry1A基因及cpti基因,證明轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的外源基因沒有向棉花