太谷核不育基因ms2的分子生物學(xué)研究.pdf

1、該研究首先試圖尋找與太谷核不育基因緊密連鎖的分子標(biāo)記,以矮敗小麥的高桿可育及矮桿不育DNA為親本,分別篩選了已定位在小麥4D染色體上的11對SSR引物和4個(gè)RFLP探針,另外還篩選了大麥、節(jié)節(jié)麥上的4個(gè)RFLP探針,結(jié)果這11對SSR引物和8個(gè)RFLP探針在可育及不育小麥DNA間均無差異.分別選取小麥4D染色體短臂上兩個(gè)頂端區(qū)域內(nèi)的4條EST序列設(shè)計(jì)4對PCR引物,在矮敗小麥可育及不育基因組DNA中進(jìn)行擴(kuò)增,結(jié)果4對來自EST序列的PC

2、R引物在矮敗小麥中有較強(qiáng)的擴(kuò)增帶,但在可育及不育材料間均不表現(xiàn)多態(tài).為探討太谷核不育小麥敗育機(jī)制,該文利用cDNA-AFLP技術(shù),以太谷核不育小麥減數(shù)分裂開始前的可育株及不育株花藥mRNA為材料,對太谷核不育小麥敗育發(fā)生過程中基因的差異表達(dá)進(jìn)行了分析.結(jié)果表明,在花藥減數(shù)分裂開始前,可育花藥與不育花藥中基因的表達(dá)存在很大差異.在所統(tǒng)計(jì)的144對引物組合擴(kuò)增結(jié)果中,在90bp至622bp之間的擴(kuò)增條帶數(shù)共為2712條,平均每對引物擴(kuò)增出1

3、8.8條帶紋.在所篩選的469對AFLP引物組合中,共有193對引物組合在可育株與不育株間表現(xiàn)多態(tài),篩選出232條差異片段.在反向Northern印跡鑒定的50條差異片段中共有30條為陽性克隆.對30條陽性克隆進(jìn)行了序列測定和同源性比對分析,其中22條序列與GenBank中已知功能基因同源,17條序列在可育花藥中特異表達(dá)或表達(dá)量高,5條序列在敗育花藥中特異表達(dá)或表達(dá)量高.24條序列與小麥EST同源,這些序列絕大多數(shù)來源于小麥減數(shù)分裂期花