不同倍性泥鰍鰭細胞培養(yǎng)及分子細胞遺傳學研究.pdf

1、為探討不同倍性泥鰍染色體組構(gòu)成及建立活體制備染色體標本的方法,本研究以自然二倍體泥鰍、正反雜交三倍體泥鰍(4n♀×2n♂、2n♀×4n♂)、自然四倍體泥鰍為研究對象,利用鰭組織培養(yǎng)獲得染色體制備的材料,建立了泥鰍鰭組織細胞制備染色體標本方法,同時對不同倍性泥鰍鰭組織培養(yǎng)細胞的染色體的數(shù)目、核型做了分析,利用Ag-NORs、CMA3/DA/DAPI三重熒光染色技術(shù)等對不同北行泥鰍的染色體帶型作了進行了系統(tǒng)研究。
　　1.不同倍性泥鰍

2、鰭細胞培養(yǎng)及染色體標本制備方法的建立
　　選擇10％的碘伏溶液殺菌效果良好,對于細胞生長影響較小,尤以15min效果最明顯,細胞遷出迅速;在終止培養(yǎng)前3h加入秋水仙素至終濃度為1.5μg/ml,自然二倍體、雜交三倍體(4n♀×2n♂)、自然四倍體泥鰍鰭細胞中期分裂相染色體眾數(shù)最高,分別為93.33％、90％、70％;25℃低滲處理40min,可以獲得大量圖像清晰、長度適中、分散良好、數(shù)目完整的染色體中期分裂相。
　　2.不同

3、倍性泥鰍染色體帶型研究
　　(1)Ag-NORs:自然二倍體泥鰍鰭培養(yǎng)的細胞染色體中期分裂相中Ag-NORs數(shù)為2對,正反雜交三倍體泥鰍(4n♀×2n♂、2n♀×4n♂)鰭培養(yǎng)的細胞染色體中期分裂相中Ag-NORs數(shù)為3對,自然四倍體泥鰍鰭培養(yǎng)的細胞染色體中期分裂相中Ag-NORs數(shù)為4對。
　　(2)CMA3/DA/DAPI三重熒光染色:自然二倍體泥鰍鰭培養(yǎng)的細胞染色體中期分裂相中CMA3陽性位點為2對,正反雜交三倍體泥鰍

4、(4n♀×2n♂、2n♀×4n♂)鰭培養(yǎng)的細胞染色體中期分裂相中CMA3陽性位點均為3對,自然四倍體泥鰍鰭培養(yǎng)的細胞染色體中期分裂相中CMA3陽性位點為4對。
　　(4)Ag-NORs、CMA3/DA/DAPI熒光顯帶在染色體上的位置位于第1對中部著絲粒染色體(M1)的短臂末端,也就是核仁組織區(qū)的位置。
　　綜上所述,利用不同倍性泥鰍鰭培養(yǎng)的細胞可以達到活體制備染色體的目的,能得到連續(xù)的實驗結(jié)果;對不同倍性泥鰍鰭細胞制備的染