不結(jié)球白菜‘矮腳黃’自交不親和性的SSR分子標(biāo)記.pdf

1、不結(jié)球白菜（Brassica campestris ssp.chinensis Makino）是十字花科（Cruciferae）蕓薹屬（Brassica）作物二倍體基本種之一，是我國(guó)南方重要的葉菜類蔬菜，在日常生活中占有重要的地位。不結(jié)球白菜屬于異花授粉作物，具有自交不親和特性。本研究利用不結(jié)球白菜自交不親和材料與自交親和材料配置雜交組合，獲得F2分離群體，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行自交不親和性狀的遺傳分析以及SSR分子標(biāo)記的篩選。研究結(jié)果如下:

2、
　　1.以不結(jié)球白菜‘002’和‘210’為親本，配制2個(gè)雜交組合F2(‘002’ב210’)和F2(‘210’ב002’)，研究了不結(jié)球白菜F2群體自交不親和性狀的遺傳特性。通過(guò)親和指數(shù)的測(cè)定，對(duì)其親和性進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和x2測(cè)驗(yàn)，結(jié)果表明兩個(gè)雜交組合在F2群體中自交不親和性狀發(fā)生分離，出現(xiàn)了自交不親和與自交親和兩種類型的植株。F2(‘002’ב210’)分離群體調(diào)查了78株，其中自交親和植株有57株，自交不親和植株有21株。F

3、2(‘210’ב002’)分離群體有158株，其中自交親和植株有113株，自交不親和植株有45株。自交親和植株與自交不親和植株分離比符合3∶1。自交親和性對(duì)自交不親和性是由一對(duì)等位基因控制的顯性遺傳性狀。
　　2.為了找到與不結(jié)球白菜自交不親和基因連鎖的分子標(biāo)記，選用352對(duì)SSR引物對(duì)不結(jié)球白菜自交不親和和自交親和的親本進(jìn)行PCR擴(kuò)增和電泳檢測(cè)，結(jié)果表明:親本中有21對(duì)SSR引物可穩(wěn)定表現(xiàn)出多態(tài)性，多態(tài)性比例為6％。利用篩選出

4、的21對(duì)SSR引物在F2(‘210’ב002’)的158個(gè)單株中進(jìn)行SSR擴(kuò)增，獲得3個(gè)與不結(jié)球白菜自交不親和基因連鎖的分子標(biāo)記，分別為Na12E02，KBRH138G23以及sR6688。通過(guò)Mapmaker3.0軟件計(jì)算連鎖距離，3個(gè)標(biāo)記與自交不親和基因的遺傳距離分別為3.08cM,5.35cM和12.91cM。
　　3.在獲得與自交不親和基因連鎖的分子標(biāo)記Na12E02的基礎(chǔ)上，采用MISA和Primer3.0軟件在Na1

5、2E02附近3cM范圍開發(fā)設(shè)計(jì)SSR引物，最終得到22對(duì)SSR分子標(biāo)記。研究發(fā)現(xiàn)，開發(fā)設(shè)計(jì)的22對(duì)SSR引物均能在親本中擴(kuò)增出較為清晰的條帶，有效引物比例為100％，其中5對(duì)引物在親本中具有多態(tài)性，多態(tài)性引物比例為22.7％。將篩選得到的5對(duì)SSR引物在F2(‘210’ב002’)分離群體的158個(gè)單株中進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證，得到一個(gè)與自交不親和基因緊密連鎖的分子標(biāo)記BrSS15。通過(guò)Mapmaker3.0軟件計(jì)算遺傳距離為0.49cM。這