團頭魴三倍體和雌核發(fā)育的誘導及其主要生物學特性的研究.pdf

1、團頭魴(Megalobrama amblycephala)又稱武昌魚，屬鯉形目(Cypdniformes)，鯉科（Cyprinidae），魴屬(Megalobrama)，是我國特有的淡水經濟魚類。由于它養(yǎng)殖成本低、生長快、成活率高等優(yōu)點，早在20世紀60年代就已成為我國主要的淡水養(yǎng)殖品種之一。本研究是利用冷休克對團頭魴進行了三倍體及雌核發(fā)育的誘導，期望篩選出誘導三倍體和雌核發(fā)育的最佳條件;并同時對團頭魴雌核發(fā)育個體的主要形態(tài)特征及遺傳特

2、征進行分析;用微衛(wèi)星DNA分子標記的方法對誘導團頭魴雌核發(fā)育個體的遺傳物質來源進行檢測，以及對團頭魴雌核發(fā)育群體的純合度及遺傳多樣性進行分析。主要研究結果如下:
　　 1團頭魴三倍體的誘導及鑒定
　　 采用冷休克抑制第二極體釋放的方法誘導團頭魴三倍體，篩選出有效的處理溫度、起始時間和持續(xù)時間，比較團頭魴三倍體倍性的鑒定方法，并對團頭魴二倍體與三倍體早期生長進行比較。結果表明在孵化水溫26～27℃，起始時間為受精后3min

3、，0～2℃持續(xù)處理25 min的效果最佳，孵化率和三倍體誘導率分別達到了34.31％和60.67％。處理溫度、起始時間、持續(xù)時間都會對三倍體的誘導率產生不同影響。采用染色體計數、DNA含量測定和紅細胞大小測定法分別對三倍體個體進行了鑒定。結果顯示，三倍體的染色體3n=72，對照組二倍體2n=48;流式細胞儀測定的三倍體與二倍體DNA含量差異極顯著(p＜0.01），其比值為1.49∶1;三倍體與二倍體的紅細胞及核大小的各項數據之間均存在差

4、異顯著性，尤其是核體積和紅細胞體積存在著極顯著差異(P＜0.01)，三倍體紅細胞和核體積分別為二倍體的1.40倍和1.51倍。染色體計數、DNA含量測定和紅細胞（核）的大小測量方法都可以準確鑒定團頭魴三倍體個體;在生長的早期團頭魴二倍體的生長速度要快于三倍體。
　　 2雌核發(fā)育的誘導及主要生物學特性的研究
　　 采用松浦鏡鯉(Cyprinus carpio Songpu carp)遺傳滅活的精子刺激團頭魴卵子，冷休克抑制

5、卵子第二極體的釋放獲得團頭魴雌核發(fā)育個體。使用流式細胞儀檢測雌核發(fā)育個體，其DNA含量與正常團頭魴二倍體的DNA含量并沒有差異顯著性(P＞0.05），表明雌核發(fā)育個體為二倍體。對雌核發(fā)育群體的生長、形態(tài)特征、性腺發(fā)育、紅細胞大小、染色體組型進行分析。結果表明:雌核發(fā)育個體早期的生長優(yōu)勢明顯小于正常個體;對雌核發(fā)育群體與正常群體通過可數、可量性狀分析比較，兩個群體沒有顯著性差異(P＞0.05)，雌核發(fā)育群體出現了畸形個體，尾鰭條數為12，

6、而正常個體為18～20，雌核發(fā)育與正常個體的差異顯著性(P＜0.05);觀察20尾雌核發(fā)育個體的性腺發(fā)育情況，所有個體都為雌性且性腺發(fā)育良好，沒有出現性腺萎縮的個體;通過對紅細胞各個數據的測量，雌核發(fā)育群體與正常群體的沒有顯著性差異（P＞0.05）;通過對染色體條數及組性的分析，兩個群體的染色體條數都是48，核型都為18m+26sm+4st。
　　 3團頭魴雌核發(fā)育群體的微衛(wèi)星標記分析
　　 通過引物優(yōu)化，篩選父母本具有

7、特異性的8對微衛(wèi)星引物，對雌核發(fā)育個體進行檢測，結果表明雌核發(fā)育個體的遺傳物質均來自母本，沒有父本的遺傳物質滲入。篩選出母本為雜合的10對微衛(wèi)星引物對子代的純合性進行評價，結果顯示雌核發(fā)育后代在TTF-EST46、TTF-EST61、TTF-EST851全部為純合，而TTF-EST12座位上的重組率為86.4％，其他6個位點的重組率為100％，這10個位點的平均重組率為68.64％。并利用這10對微衛(wèi)星引物對團頭魴對照組和雌核發(fā)育群體的