PPV-HN-2011毒株分子生物學(xué)特性研究及利用桿狀病毒表達(dá)其VP2蛋白.pdf

1、豬細(xì)小病毒(porcine parvovirus，PPV)是引起豬群繁殖障礙的重要病原之一，母豬感染PPV的典型臨床繁殖障礙特征是返情、流產(chǎn)、木乃伊胎和死胎，此外，PPV可以增強(qiáng)豬圓環(huán)病毒2型的臨床癥狀，也是引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合癥(porcine postweaing mulisystemic wastingsyndome，PMWS)的病原之一。本論文針對(duì)PPV HN-2011毒株的NS1與VP2基因進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析，利用桿狀病毒

2、表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)PPV的VP2蛋白，并進(jìn)行VP2蛋白的抗原特征分析，其目的是為了了解PPVHN-2011毒株的遺傳背景信息，并比較PPV傳統(tǒng)滅活疫苗與重組VP2亞單位疫苗的免疫效果。
　　試驗(yàn)一:豬細(xì)小病毒HN-2011全基因組測(cè)序及生物信息學(xué)分析
　　通過設(shè)計(jì)涵蓋PPV基因組的5對(duì)引物，分段克隆PPV的基因片段，將PCR鑒定為陽性的重組質(zhì)粒送大連寶生物工程公司測(cè)序。結(jié)果表明HN-2011株序列長(zhǎng)為4773nt，其編碼區(qū)均不存在

3、堿基的插入與缺失，ORF2編碼VP1和VP2下游存在一個(gè)127-bp重復(fù)。將中國(guó)河南PPV HN-2011毒株的基因組序列與GenBank收錄的的PPV的NS1和VP2基因序列進(jìn)行了分析表明，PPV分離株可以劃分為4組，中國(guó)的PPV主要集中在A和B兩組，只有一個(gè)JY株存在于C組;PPV基因組的壓力選擇分析顯示出，NS1和VP2基因分別受到負(fù)向和正向的選擇;PPV VP2蛋白3維結(jié)構(gòu)顯示:幾乎上所有的氨基酸變異的多態(tài)性位點(diǎn)主要集中在病毒衣

4、殼蛋白的表面。
　　實(shí)驗(yàn)二:豬細(xì)小病毒VP2基因在重組桿狀病毒中的表達(dá)及抗原特性分析
　　首先利用PCR擴(kuò)增VP2基因，將VP2基因轉(zhuǎn)入桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體pFastBac(I)中，構(gòu)建重組的質(zhì)粒pFastbac-VP2，再將該重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入DH10Bac感受態(tài)細(xì)胞中，并獲得重組桿狀病毒。將得到的重組桿狀病毒接種昆蟲細(xì)胞，通過SDS-PAGE、IFA、Western blot和血凝性鑒定VP2蛋白的表達(dá)。
　　將得到的VP2