丹參微生物的種群多樣性及其生物誘導(dǎo)效應(yīng).pdf

1、丹參（Salvia miltiorrhiza Bunge）是我國傳統(tǒng)常用的大宗類藥材，廣泛用于心血管疾病的治療，因此丹參市場需求日益增大。植物生長過程中，離不開微生物的作用，微生物對植物的營養(yǎng)、生長、抗性和次級代謝都有顯著的影響，鑒于丹參相關(guān)微生物研究報道較少，本文對種植于不同地區(qū)的同一品系的丹參進行研究，比較不同產(chǎn)區(qū)的根際和根部的微生物種群多樣性，并采用傳統(tǒng)方法分離微生物，研究這些微生物對丹參毛狀根的誘導(dǎo)效應(yīng)，探索這些微生物的功能。<

2、br>　　首先，采用宏基因組分析方法，比較了不同產(chǎn)區(qū)丹參的微生物種群多樣性，并結(jié)合HPLC方法測定丹參根部的活性成分含量。結(jié)果:比較不同產(chǎn)區(qū)的細菌種群多樣性，發(fā)現(xiàn)所有樣品具有相同的優(yōu)勢細菌門——Proteobacteria，而優(yōu)勢細菌屬卻并不相同，根際土壤的優(yōu)勢屬為Sphingomonas或GP6，而根部的優(yōu)勢屬為Rhizobium。比較不同產(chǎn)區(qū)的真菌種群多樣性，發(fā)現(xiàn)其較細菌更具有明顯的地域差異性。不同產(chǎn)區(qū)的土壤和根部的優(yōu)勢真菌均分屬2

3、個門——子囊菌門(Ascomycota)、擔(dān)子菌門（Basidiomycota），此外浙江根際土壤還特有球囊菌門（Glomeromycota）;在屬水平上，不同地區(qū)真菌的優(yōu)勢屬差別較大:比較根際土壤，山東、四川樣品的優(yōu)勢屬為Tetracladium，寧夏樣品的優(yōu)勢屬為Hannaella，而山西和陜西樣品的優(yōu)勢屬則為Fusarium;比較根部，山東、四川、浙江樣品的優(yōu)勢屬為Thielaviopsis，寧夏、山西、陜西樣品的優(yōu)勢屬分別為Te

4、tracladium、Fusarium和Cladosporium。
　　同時，采用HPLC方法對不同產(chǎn)地丹參根的活性成分進行定量檢測，并進行聚類分析，發(fā)現(xiàn)相比于南方地區(qū)，北方地區(qū)的丹參含有很高含量的活性成分。其中陜西地區(qū)樣品酚酸類含量最高，為8.23 mg·g-1，山西地區(qū)的總丹參酮含量最高，為7.23 mg·g-1。聚類結(jié)果顯示四川與浙江兩地丹參品質(zhì)較為相近，這與丹參微生物群落PCA分析結(jié)果相似，表明丹參微生物群落與其活性成分之

5、間存在一定的相關(guān)性。
　　其次，從不同產(chǎn)區(qū)的丹參根際和根部分離到64株真菌和細菌，并分析這些菌株對丹參毛狀根次級代謝的誘導(dǎo)效應(yīng)。結(jié)果:16株細菌和13株真菌顯著影響毛狀根的生長和次生產(chǎn)物的積累。16株細菌歸屬于7個屬，分別為Pseudomonas、Lysobacter、Enterobacter、Sphingomonas、Rhizobiaceae和Bacillus。5株細菌顯著促進毛狀根的生長，8株顯著促進酚酸類物質(zhì)的積累，4株顯著

6、促進丹參酮類物質(zhì)的積累。其中3株綠針假單胞菌Pseudomonas chlororaphis HYR26、LYR2和HYR1同時促進毛狀根生長、丹酚酸和丹參酮的積累，表明這類菌株具有較強的活性。13株真菌中共歸屬于8個屬，分別為:Hypoxylon、Macrophomina、Lichtheimia、Aspergillus、Penicillium、Fusarium、Alternaria和Talaromyces，其均能在一定程度上促進丹參酮

7、的積累，其中有12株的促進效果達到顯著水平(P＜0.05)，以LYRSF8的促進效果最為明顯。LYRSF8為煙曲霉菌Aspergillusfumigatus，其誘導(dǎo)后的毛狀根中二氫丹參酮Ⅰ(DihydrotanshinoneⅠ，DT-Ⅰ)、隱丹參酮(Cryptotanshinone，CT)和丹參酮Ⅰ(TanshinoneⅠ，T-Ⅰ)的含量分別為對照組的2.62、1.58和7.03倍。真菌誘導(dǎo)子的誘導(dǎo)活性成分極大可能為多糖，且DT-Ⅰ和C

8、T隨著多糖含量的變化呈現(xiàn)一致的變化趨勢，這與RDA分析結(jié)果一致，推測其可能具有共同的代謝途徑。進一步對同一屬種的菌株進行分析發(fā)現(xiàn)，毛狀根DT-Ⅰ和CT的含量隨著多糖含量的增加先增后減?？傊毦鷮γ珷罡铀犷愇镔|(zhì)的積累的促進作用較為顯著，而真菌對丹參酮類物質(zhì)的積累促進作用較為顯著。
　　綜上所述，種植于不同產(chǎn)區(qū)同一品系的丹參其活性成分含量和微生物群落結(jié)構(gòu)均表現(xiàn)出極大差異。微生物種群既存在一定差別，但也存在著一定的共性，其中細菌群落