秋水仙堿創(chuàng)制四倍體不結(jié)球白菜新材料.pdf

1、本文主要從同源四倍體不結(jié)球白菜的誘導(dǎo)、鑒定展開，并對(duì)二倍體和四倍體不結(jié)球白菜的主要農(nóng)藝性狀、營養(yǎng)品質(zhì)、生理生化特性、抗壞血酸合成途徑相關(guān)基因表達(dá)進(jìn)行比較分析，同時(shí)對(duì)二、四倍體不結(jié)球白菜進(jìn)行了核型分析，為多倍體不結(jié)球白菜的遺傳育種及細(xì)胞遺傳學(xué)奠定了一定的理論基礎(chǔ)并提供了實(shí)踐方法。
　　1.用1.5g·L-1、2g·L-1這兩種濃度的秋水仙素對(duì)子葉期不結(jié)球白菜生長點(diǎn)進(jìn)行不同次數(shù)的處理來進(jìn)行多倍體誘導(dǎo)，根據(jù)形態(tài)學(xué)、解剖學(xué)、細(xì)胞學(xué)特征、農(nóng)

2、藝性狀和流式細(xì)胞儀進(jìn)行倍性鑒定。結(jié)果表明，濃度為1.5g·L-1的秋水仙素處理6次的效果最好，四倍體加倍率達(dá)8.55％。與二倍體相比，四倍體葉片厚度、氣孔大小、花器官大小、花粉?？v橫徑、種子單粒徑等方面表現(xiàn)出“巨大性”，但四倍體株高減小。四倍體十葉厚、種子直徑、50粒重、花瓣長和寬、角果長、角果棱寬、角果喙長、角果橫寬、花粉粒長和寬、氣孔長和寬、氣孔保衛(wèi)細(xì)胞葉綠體數(shù)分別比二倍體增加23.2％、17.0％、31.3％、38.6％、66.3

3、％、19.6％、26.5％、54.5％、16.1％、31.2％、34.9％、64.3％、44.0％和87.5％,差異都達(dá)極顯著。四倍體的氣孔密度顯著降低。二倍體不結(jié)球白菜體細(xì)胞染色體數(shù)為2n=2x=20，四倍體染色體數(shù)為2n=4x=40。
　　2.對(duì)二、四倍體不結(jié)球白菜的主要農(nóng)藝性狀、營養(yǎng)品質(zhì)和生理生化特性進(jìn)行了研究。結(jié)果表明:與二倍體相比，四倍體植株顏色呈深綠色，束腰，整個(gè)生育期葉片寬度和葉柄寬度都顯著大于二倍體，而株高、葉數(shù)、

4、葉柄長度和葉片長度比二倍體有所減少。四倍體可溶性糖、可溶性蛋白、干物質(zhì)和有機(jī)酸分別比二倍體增加15.7％、14.6％、16.9％和16.2％，粗纖維比二倍體減少36.4％，差異均達(dá)極顯著。四倍體的葉綠素含量、超氧化物歧化酶、過氧化氫酶和過氧化物酶活性均顯著高于二倍體。丙二醛含量顯著低于二倍體。
　　3.通過高效液相色譜儀對(duì)二、四倍體不結(jié)球白菜不同組織不同時(shí)期的抗壞血酸含量進(jìn)行了測定，并利用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)對(duì)不結(jié)球白菜中抗壞血酸L

5、-半乳糖合成途徑的6個(gè)相關(guān)基因的表達(dá)進(jìn)行分析。結(jié)果表明:在幼苗時(shí)期，四倍體葉片中的還原性抗壞血酸和總抗壞血酸分別比二倍體高21.4％和10.8％，葉柄中的分別比二倍體高12.5％和10.3％，成熟時(shí)期四倍體葉片中的還原性抗壞血酸和總抗壞血酸分別比二倍體高10.3％和6.74％，葉柄中的分別比二倍體高25.9％和15.0％，差異都達(dá)極顯著水平。實(shí)時(shí)定量PCR表明無論是在幼苗時(shí)期還是在成熟時(shí)期，BcVTC1，BcGME，BcVTC2，BcV

6、TC4和BcGLDH這5個(gè)基因在葉片中和葉柄中的表達(dá)量都高于對(duì)照，而BcPMM沒有明顯變化。
　　4.以不結(jié)球白菜品種‘特矮青’的花蕾為材料，采用常規(guī)壓片法對(duì)花粉母細(xì)胞減數(shù)分裂終變期染色體進(jìn)行核型分析，并與根尖有絲分裂中期的染色體核型進(jìn)行比較。結(jié)果表明:二者的核型公式均為2n=2x=20=10m+8sm(2SAT)+2st，其中第1、2、3、4、6對(duì)為中著絲粒染色體，第5、7、8、9對(duì)為近中著絲粒染色體，第10對(duì)為近端著絲粒染色體

7、，第3對(duì)具有隨體，核型類型屬于2A型，為基本對(duì)稱型。長度在1.1-1.5mm的花蕾，容易獲得減數(shù)分裂終變期的分裂相。
　　5.以二、四倍體不結(jié)球白菜的幼嫩雌蕊及根尖為材料，采用常規(guī)壓片法對(duì)其進(jìn)行染色體核型分析。無論是二倍體還是四倍體，幼嫩子房中處于有絲分裂中期的細(xì)胞都比根尖的多，且中期染色體形態(tài)與根尖的染色體無明顯區(qū)別，隨體均清晰可見。兩種材料獲得的二倍體不結(jié)球白菜核型公式均為2n=2x=20=10m+8sm(2SAT)+2st，