毛竹MLE轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)座活性的鑒定與分析.pdf_第1頁
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1、轉(zhuǎn)座子(TransposableElement,TEs),又稱跳躍因子,是能夠改變自身位置的一段DNA序列。Mariner-like轉(zhuǎn)座子（簡(jiǎn)稱MLE轉(zhuǎn)座子）是一類在動(dòng)物和植物中廣泛存在的DNA轉(zhuǎn)座子。
　　 本課題組在分離得到的具有完整轉(zhuǎn)座酶結(jié)構(gòu)的毛竹MLE座子的基礎(chǔ)上,1）采用釀酒酵母菌（Saccharomycescereviszae）檢測(cè)系統(tǒng),鑒定其轉(zhuǎn)座活性：將轉(zhuǎn)座酶CDS序列,構(gòu)建到酵母供體載體pAG413-gal上,將

2、非自主MLE座子,構(gòu)建到酵母表達(dá)載體pWL89a上,然后將這兩個(gè)重組載體共同轉(zhuǎn)化酵母,經(jīng)過選擇性培養(yǎng)、誘導(dǎo)篩選后,對(duì)活性酵母菌液PCR檢測(cè),發(fā)現(xiàn)竹亞科的MLE座子在酵母中也能轉(zhuǎn)座,通過序列比對(duì),發(fā)現(xiàn)其轉(zhuǎn)座后并沒產(chǎn)生轉(zhuǎn)座足跡。2）采用植物擬南芥(Arabidopsisthaliana)轉(zhuǎn)基因表達(dá)系統(tǒng),鑒定其在植物中活性表達(dá)：將非自主MLE專座子和轉(zhuǎn)座酶全長構(gòu)建到擬南芥表達(dá)載體PCAMBIA1304+上,然后轉(zhuǎn)化到擬南芥中,篩選和鑒定轉(zhuǎn)基因

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