我國(guó)豬瘟病毒流行株致病性分析及流行病學(xué)信息系統(tǒng)的建立與應(yīng)用.pdf

1、豬瘟(ClassicalSwineFever，CSF)是由豬瘟病毒(Classicalswinefevervirus，CSFV)引起的豬的高度致死性、接觸性傳染病。本研究系統(tǒng)分析了我國(guó)CSFV流行毒株的致病特性和抗原性差異，建立了第一個(gè)豬瘟流行病學(xué)信息系統(tǒng)(CSFinfo)。 在對(duì)9株臨床表現(xiàn)高、中、低致病特征的CSFV流行毒株進(jìn)行了TCID50、MLD和E2基因主要區(qū)域序列測(cè)定，免疫熒光與形態(tài)學(xué)等系統(tǒng)生物學(xué)特性鑒定的基礎(chǔ)上。利

2、用第3代細(xì)胞毒進(jìn)行了試驗(yàn)豬體傳代和同居豬感染試驗(yàn)，結(jié)果表明，9株CSFV毒株在第3～5代表現(xiàn)出致病力增強(qiáng)的趨勢(shì)，至7或8代致病力趨于穩(wěn)定，且高于標(biāo)準(zhǔn)石門強(qiáng)毒株的致病特征。感染豬呈現(xiàn)較典型的CSF臨床癥狀和不同程度的病理變化，各種臟器經(jīng)豬瘟免疫熒光抗體試驗(yàn)檢測(cè)均為強(qiáng)陽性，說明在臨床表現(xiàn)不同致病性的流行毒株在回歸本動(dòng)物連續(xù)傳代后均表現(xiàn)出強(qiáng)致病性。對(duì)7株流行毒株E2基因主要區(qū)域進(jìn)行了序列分析，結(jié)果表明不同代次血毒未發(fā)生堿基變異，其基因型穩(wěn)定。

3、采用豬瘟熒光定量RT-PCR技術(shù)對(duì)7株流行株不同代次血毒進(jìn)行病毒定量檢測(cè)，結(jié)果表明1～3代病毒含量較低，且滴度增加不明顯；隨著傳代次數(shù)的增加，病毒滴度升高；但在代傳代過程中，血液中病毒含量保持在一個(gè)較穩(wěn)定的水平。說明通過本動(dòng)物傳代后CSFV在血液中的含量增加是導(dǎo)致臨床致病力增強(qiáng)的因素之一。 利用人工感染臨床表現(xiàn)中等致病力的CSFV流行毒株(JL1/94和GXBH1/98)并耐過的母豬和公豬進(jìn)行同居自然交配，發(fā)現(xiàn)CSFV在母豬體內(nèi)

4、能持續(xù)帶毒750天而并不表現(xiàn)出臨床癥狀，同時(shí)可誘導(dǎo)垂直傳播、水平傳播及母豬繁殖障礙。由此表明，CSFV持續(xù)感染帶毒豬是造成CSF長(zhǎng)期流行和存在的根源。 采用豬瘟強(qiáng)弱毒單克隆抗體對(duì)我國(guó)17個(gè)省(市、自治區(qū))的33株流行毒株進(jìn)行了抗原性差異分析，結(jié)果表明33株流行毒株中，只有3株與弱毒單抗呈弱反應(yīng)性，而其它毒株不被弱毒單抗體所識(shí)別，說明流行毒株的E2蛋白抗原結(jié)構(gòu)域中不存在被弱毒單抗所識(shí)別的抗原表位；而33株流行株可被強(qiáng)毒單抗分為強(qiáng)反

5、應(yīng)和弱反應(yīng)兩組。33株流行株由E2基因劃分的4組氨基酸序列分別具有一致獨(dú)特的位點(diǎn)變異規(guī)律，強(qiáng)反應(yīng)組(761G，764L)和弱反應(yīng)組(761R，764P)分別具有2個(gè)獨(dú)特的變異位點(diǎn)。同時(shí)，761K位點(diǎn)變異并不影響毒株與強(qiáng)毒單抗的反應(yīng)結(jié)果。761G和764L應(yīng)該是針對(duì)強(qiáng)毒單抗與CSFV抗原結(jié)合的關(guān)鍵位點(diǎn)。 將數(shù)據(jù)庫(kù)技術(shù)、GIS技術(shù)、生物信息學(xué)技術(shù)與CSF流行病學(xué)數(shù)據(jù)相結(jié)合，經(jīng)過了需求分析、設(shè)計(jì)、編碼實(shí)現(xiàn)測(cè)試、測(cè)試及維護(hù)等五個(gè)階段，建

6、立了第一個(gè)CSF流行病學(xué)信息系統(tǒng)(CSFinfo)。CSFinfo采用統(tǒng)一管理，統(tǒng)一更新，保證信息的全面系統(tǒng)性；使用地圖信息顯示方式，全面、準(zhǔn)確的反應(yīng)毒株在不同地點(diǎn)/地區(qū)的分布狀況；使用多種統(tǒng)計(jì)圖、表靈活的展示當(dāng)前和歷史的各種統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)，方便全面了解流行毒株的發(fā)展變化規(guī)律；采用ESRI公司的地理信息處理軟件ArcGIS和MapObject作為開發(fā)平臺(tái)，結(jié)合微軟公司的COM技術(shù)，系統(tǒng)模塊化設(shè)計(jì)，提高了系統(tǒng)的擴(kuò)展性和管理性；整體開發(fā)方案部