福建省豬圓環(huán)病毒2型分子流行病學調查.pdf

1、PCV-2可造成感染豬群的免疫抑制,降低豬群對其他疾病的抵抗力及對疫苗的免疫應答能力,容易并發(fā)或繼發(fā)其他疾病。目前,PCV-2在豬群中廣泛流行和傳播,已經給全球養(yǎng)豬業(yè)帶來了嚴重的經濟損失。本研究為了解PCV-2在福建省豬群中的感染情況,采用TaqMan熒光實時定量PCR方法對福州、龍巖、南平、寧德、莆田、泉州、三明、廈門、漳州等地的組織樣品進行PCV-2病原學檢測。同時為了解福建省PCV-2流行毒株的遺傳變異情況,利用PCR技術,以福州

2、、南平、漳州、寧化、上杭、福清、詔安部分發(fā)病豬組織樣品DNA為模板,分段擴增PCV-2全基因組序列。PCR產物經克隆純化后,對目的片段進行核苷酸序列測定,并利用DNAStar序列分析軟件,對9株福建流行株與GenBank國內外PCV-2分離株進行核苷酸序列及氨基酸序列同源性比對。上述研究所得結果如下:
　　 1.所有檢測豬場均存在不同程度的PCV-2感染,2008～2010年規(guī)模場發(fā)病豬中的PCV-2抗原陽性率分別為55.28％

3、(293／530)、62.26％(424／681)、72.1％(328／455)；散養(yǎng)戶的發(fā)病豬群中PCV-2抗原陽性率分別為67.14％(94／140)、72.08％(253／351)、81.00％(243／300)；臨床健康豬群中PCV-2抗原陽性率為40.47％(291／719)、45.34％(185／408)和80.61％(420／521)。PCV-2病原學調查顯示,我省豬群高度感染PCV-2,并呈逐年上升趨勢。
　　

4、2.本實驗克隆測序獲得9株福建流行株,其中有4株基因組全長為1767 bp,5株長為1768 bp,與資料報道相符。9株福建流行株全基因組核苷酸同源性為95.8％～98.6％,與19株國內外毒株的同源性為93.7％～99.5％。PCV-2基因組有三個主要開放閱讀框ORF1、O RF2和ORF3。9株PCV-2福建流行株與19株國內外毒株的主要開放閱讀框核苷酸同源性依次為:97.0％～99.8％、88.6％～99.7％和96.2％～100

5、％。推倒的氨基酸同源性為97.0％～99.8％、76.5％～99.6％、90.5％～100％。
　　 3.9株福建流行株Cap蛋白氨基酸序列存在以下4個變異高頻區(qū):V1(52～90 aa)、V2(120～140 aa)、V3(60～170 aa)、V4(179～191 aa),其中前三個高變區(qū)域位于Cap蛋白主要抗原表位區(qū)。這些位點曝露于免疫壓力之下,在其他因素作用下可能會誘導變異成臨床致病力不同的新毒株。ORF3蛋白40～41

6、 aa及102～105 aa為變異高頻區(qū),可能會對病毒毒力產生影響。
　　 4.應用MEGA5.03序列分析軟件,采用Neighor-Joining算法,可信度Bootstrap值設為1000,利用9株福建流行株與GenBank上獲取的其他45株PCV-2分離株的ORF2序列構建系統(tǒng)發(fā)育樹。系統(tǒng)發(fā)育樹分為PCV-2a、PCV-2b和PCV-2c三大分支,9株福建流行株中有4株為PCV-2a,5株為PCV-2b,未發(fā)現(xiàn)PCV-2c