低滲誘導(dǎo)櫛孔扇貝三倍體及與其它方法的比較.pdf

1、本文以櫛孔扇貝(Chlamysfarreri)為研究對象,通過低滲處理抑制櫛孔扇貝受精卵第二極體(PB2)的釋放產(chǎn)生三倍體。研究中探索了低滲處理的最佳誘導(dǎo)條件,進行了三倍體的誘導(dǎo)和培育以及與其它方法的比較,并通過電鏡觀察了受精卵經(jīng)低滲處理后超微結(jié)構(gòu)的變化,以期為多倍體育種理論提供新的實驗和實踐依據(jù)。
　　 研究主要分為以下幾個部分:
　　 1、低滲誘導(dǎo)櫛孔扇貝三倍體最佳誘導(dǎo)參數(shù)的探討
　　 采用低滲方法,通過不同

2、誘導(dǎo)參數(shù)包括:水溫20℃時,分別進行不同鹽度處理(8～20)、不同起始處理時間(受精后15～40min)和不同持續(xù)處理時間(10～25min)的實驗。結(jié)果表明:以低滲鹽度S=14,受精后30min開始處理,持續(xù)處理20min,誘導(dǎo)率最高,可達(92.36±2.41)％。
　　 2、櫛孔扇貝三倍體的培育
　　 采用低滲方法,以最佳誘導(dǎo)條件誘導(dǎo)櫛孔扇貝三倍體,D型幼蟲期,處理組幼蟲表現(xiàn)出明顯的生長優(yōu)勢(P＜0.01),不僅生

3、長速度快,而且發(fā)育到變態(tài)時,個體比二倍體大。初孵三倍體D形幼蟲誘導(dǎo)率為90.15％,在往后的幼蟲培育中,誘導(dǎo)率逐漸下降,變態(tài)附著時減少至60.92％。
　　 3、低滲誘導(dǎo)櫛孔扇貝三倍體與其他方法的比較
　　 ①低滲:采用本研究確定的最佳方案;②6-DMAP:濃度60mg/L,40～50％受精卵出現(xiàn)第一極體,處理時間15min;⑨熱休克:30℃,40～50％受精卵出現(xiàn)第一極體,處理時間15min;④冷休克:1℃,40～50

4、％受精卵出現(xiàn)第一極體,處理時間20min。四種方法進行對比,三倍體誘導(dǎo)率以低滲處理組最高為(91.43±4.14)％,6-DMAP處理組次之為(91.25±3.49)％,熱休克和冷休克誘導(dǎo)率較低,分別為(25.85±4.94)％和(21.86±2.04)％;低滲的誘導(dǎo)效果與6-DMAP相比無顯著差異,P＞0.05;低滲與6-DMAP處理組的誘導(dǎo)效果明顯優(yōu)于熱休克和冷休克組,差異顯著,P＜0.01。
　　 4、不同的低滲配置誘導(dǎo)櫛

5、孔扇貝三倍體的比較
　　 水溫20℃,催產(chǎn)獲得同一批精卵,同時受精,分別采用KC1與蒸餾水配成鹽度14的處理液、NaCl與蒸餾水配成鹽度14的處理液和用鹽度31的自然海水與蒸餾水配成鹽度14的處理液進行低滲處理,各組均能不同程度地誘導(dǎo)櫛孔扇貝受精卵產(chǎn)生三倍體,三倍體誘導(dǎo)率分別為:(90.01±3.27)％、(90.07±2.64)％、(91.43±4.14)％,各組的低滲誘導(dǎo)效果沒有顯著差異,P＞0.05。
　　 5、低

6、滲處理櫛孔扇貝受精卵的電鏡觀察
　　 采用掃描電鏡對低滲處理的櫛孔扇貝受精卵進行超微結(jié)構(gòu)的觀察,對比處理前后受精卵結(jié)構(gòu)的變化,結(jié)果表明,低滲處理能夠引起受精卵發(fā)生變化:誘導(dǎo)組受精卵明顯膨脹,體積大于對照組,并且形狀不規(guī)則;當處理結(jié)束放入正常海水浸泡后,受精卵有一定程度的恢復(fù):處理組形狀趨于規(guī)則,體積與對照組無顯著差異。
　　 采用透射電鏡對低滲處理的櫛孔扇貝受精卵進行超微結(jié)構(gòu)的觀察,對比處理前后受精卵結(jié)構(gòu)的變化,結(jié)果表明