生防菌JK-2粗毒素活性物質分析及對香蕉枯萎病誘導抗性的研究.pdf

1、生防菌短短芽孢桿菌(Brevibacillus brevis)JK-2是本實驗室從土壤中分離得到一株芽孢桿菌菌株，經(jīng)中科院及實驗室的脂肪酸鑒定儀鑒定其為短短芽孢桿菌，研究發(fā)現(xiàn)其對枯萎病原菌，青枯菌均具有一定的拮杭作用，而且能夠分泌抗菌物質到發(fā)酵液中。測定了短短芽孢桿菌(Brevibacillus brevis)JK-2的生長曲線；對其粗毒素性質進行考察，結果表明：在30℃，170 r/min的條件下，恒溫振蕩培養(yǎng)36 h，在以香蕉枯萎病

2、菌病原菌作為指示菌的條件下，該菌株粗毒素具有一定的熱穩(wěn)定性；其粗毒素抑菌作用的最適pH值為7.0，在pH3.0時和pH11.0時，仍能維持較高的抑菌活性：此粗毒素對光照、蛋白酶K、紫外照射均不敏感。 經(jīng)硫酸銨沉淀后的粗毒素上清和沉淀均失去活性。采用80％的無水乙醇對粗毒素進行處理，實驗結果表明：上清和沉淀溶解液均對香蕉枯萎病菌具有抑菌活性，但是在100℃水浴0.5 h后，沉淀失去活性。而上清的活性基本沒有變。這說明粗毒素中至少存

3、在兩種活性物質。采用SDS-PAGE、HPLC等手段對處理液進行了研究。對JK-2胞外多糖采用Sephacryl S-200和Superdex-75柱進行分離，皆出現(xiàn)明顯單峰；用紅外光譜確定其組成成分。含有羧酸、吡喃單體，但無乙酰酯。 研究了轉熒光蛋白后的生防菌JK-2的侵染特性以及處理后對香蕉組培苗的相關抗病酶活性的影響，結果表明：在30℃，12 h黑暗12 h光照培養(yǎng)條件下，GFP-JK-2不能侵染香蕉組培苗。PPO，POD

4、活性的明顯高于對照，并且延遲了PPO活性到達最大值的時間。根部SOD活性變化不明顯。莖部和葉片SOD的活性有低于對照的趨勢。MDA的含量升高，并且MDA在香蕉組培苗植株體內含量大小為：葉片>根部>莖部。 設置了不同處理對其誘導抗性進行了研究。在香蕉組培苗上接種香蕉枯萎病病菌和GFP-JK-2后，測定SOD、POD和PPO的活性及MDA含量變化。結果表明：接種GFP-JK-2菌株發(fā)酵液處理的PPO、POD活性明顯高于其他處理，對其