甘肅省昆蟲病原線蟲分子生物學(xué)鑒定.pdf

1、昆蟲病原線蟲是一類寶貴的天敵資源，對農(nóng)、林及衛(wèi)生害蟲的綜合治理、環(huán)境保護(hù)以及實(shí)現(xiàn)農(nóng)田生物多樣性，都具有重要的學(xué)術(shù)和實(shí)用價值。目前，國內(nèi)、外對昆蟲病原線蟲的分類研究主要集中在形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)等方面，運(yùn)用分子生物學(xué)技術(shù)對線蟲系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)行研究還處在起步階段。 本研究應(yīng)用PCR擴(kuò)增并測定了根據(jù)形態(tài)學(xué)鑒定方法鑒定出的在甘肅省采集的29個不同地理群體8種昆蟲病原線蟲的rDNA序列，獲得26S DNA基因約1100bp長度的序列片段，結(jié)果顯示

2、所測定的序列都具有較強(qiáng)的系統(tǒng)發(fā)育信號。鑒定結(jié)果與實(shí)驗室采用形態(tài)學(xué)方法對這些線蟲進(jìn)行詳細(xì)鑒定所得的結(jié)果完全一致。 鑒于線蟲混合蟲口問題和種間差異不顯著等特點(diǎn)，本研究摸索出單條線蟲PCR擴(kuò)增的成熟條件對全部29個地理群體的線蟲樣品ITS區(qū)進(jìn)行了PCR擴(kuò)增，結(jié)合Genbank上的昆蟲病原線蟲序列做出了系統(tǒng)發(fā)育樹。 用Alul限制性內(nèi)切酶對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行了RFLP分析，結(jié)果表明：不同地理種群的線蟲ITS區(qū)擴(kuò)增片段長度均在1100b

3、p左右，酶切圖譜種間差異不大，也不存在種內(nèi)群體的變異多態(tài)性。 本研究提供了一個對大量昆蟲病原線蟲樣本進(jìn)行快速初步鑒定的方法，對昆蟲病原線蟲資源調(diào)查和分子系統(tǒng)學(xué)等方面的研究具有重要意義。 對在甘肅省采集的8種昆蟲病原線蟲進(jìn)行了抗干燥能力測定，結(jié)果表明：昆蟲病原線蟲種類不同，其抗干燥能力也不同。在25℃、相對濕度50．5%的小空間控制器中分別處理5小時、7小時和9小時后，斯氏線蟲仍具有較高的存活率，而異小桿類線蟲幾乎全部死亡