桉樹(shù)青枯病的快速檢測(cè)及生物防控技術(shù)研究.pdf

1、桉樹(shù)(Eucalyptus)青枯?。≧alstoniasolanacearum）是我國(guó)桉樹(shù)人工林生產(chǎn)的重要病害。廣東、廣西及海南三省是我國(guó)桉樹(shù)人工商品林主產(chǎn)區(qū)，種植面積達(dá)280萬(wàn)hm2，占我國(guó)桉樹(shù)人工林總面積的76％，隨著桉樹(shù)人工林的不斷增加，青枯病的發(fā)生日趨嚴(yán)重，已成為當(dāng)前發(fā)展桉樹(shù)生產(chǎn)的主要障礙之一。因此，通過(guò)對(duì)我國(guó)桉樹(shù)人工林主產(chǎn)區(qū)發(fā)病桉樹(shù)無(wú)性系的研究，以期為生產(chǎn)提供有理論依據(jù)的快速鑒定方法，有效地控制病原菌的進(jìn)一步傳播。
　　

2、 本研究對(duì)11株病原菌形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)特征、桉樹(shù)組培苗潛伏期及輕基質(zhì)中青枯菌的PCR快速檢測(cè)、以及抗青枯桉樹(shù)無(wú)性系的測(cè)定及多粘類(lèi)芽孢桿菌生防效果研究等幾個(gè)方面進(jìn)行了研究，為桉樹(shù)青枯病早期的快速檢測(cè)和后期防治提供一定的理論指導(dǎo)和技術(shù)支持。主要研究結(jié)果如下:
　　 (1)本研究采集了我國(guó)華南沿海三省桉樹(shù)主產(chǎn)區(qū)共11株病原菌，系統(tǒng)的鑒定了其細(xì)菌學(xué)特征、生物型、形態(tài)特征及分子生物學(xué)特征。研究結(jié)果表明，桉樹(shù)青枯病是由Ralstonia

3、solanacearum病原菌引起，分離獲得的病菌進(jìn)行致病性的初步測(cè)試，接種桉樹(shù)組培苗后，能觀察到與林間自然發(fā)病癥狀一致。不同菌株間致病性差異顯著(P＜0.01和P＜0.05)，采用K-均值聚類(lèi)分析法（K=3），以發(fā)病高峰期、高峰期發(fā)病率和平均發(fā)病率為變量，結(jié)果表明HY01、HY02、DA01、HP04和HP05聚為一類(lèi)，DA02和DA03聚為另一類(lèi)，其余為第三類(lèi)。四個(gè)不同采樣點(diǎn)的發(fā)病率方差分析結(jié)果表明，廣東陽(yáng)江來(lái)源菌株與其他三個(gè)來(lái)源地

4、間致病性差異顯著(P＜0.01)。
　　 (2)本研究采用以苯酚紅為指示劑的方法，研究結(jié)果表明其中10株屬于生物型3，另一株HP03無(wú)法歸類(lèi)到相應(yīng)的生物型。根據(jù)Seal等以16SrRNA為靶基因的青枯菌特異性引物序列OLI1/Y2，能在4h小時(shí)內(nèi)準(zhǔn)確快速的擴(kuò)增出單一的特異性條帶，為檢測(cè)及進(jìn)一步研究有效控制病原菌的攜帶和傳播提供了理論依據(jù)。
　　 (3)為了實(shí)現(xiàn)桉樹(shù)組培苗和輕基質(zhì)帶菌情況的早期快速檢測(cè)，將不同濃度青枯菌懸液

5、人工接種于桉樹(shù)組培苗和輕基質(zhì)中，利用特異性寡核苷酸引物OLI1/Y2，能快速的檢測(cè)出潛伏期組培苗，以及帶菌輕基質(zhì)中青枯菌的數(shù)量。檢測(cè)結(jié)果表明:試劑盒法提取基因組DNA純度較高，A260/280均在1.7-1.9之間。桉樹(shù)組培苗組織和輕基質(zhì)中檢測(cè)限分別為102cfu·mL-1和103cfu·mL-1。因此，潛伏期PCR快速檢測(cè)法為預(yù)防病原菌的進(jìn)一步傳播提供了新的思路。
　　 (4)采用傷根法對(duì)3種常用桉樹(shù)無(wú)性系組培苗進(jìn)行初步的抗青