版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、oAgriculturalUniversityTheThesisofProfessionalMasterPurificationandCharacterizationofProteasenTT●■■●IromUUrechZSumctnctusVlSCeraGraduatewithProfessionalMasterDegree:LiuShuangshuangMentor:ChenHaihuaSecondMentor:GongChunbo
2、ⅪpeofProfessionalDegree:MasterofEngineeringAcademicfield:FoodEngineering青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要單環(huán)刺蜢(Urechisunicinctus),俗稱海腸或海腸子,其個體肥大、肉味鮮美,內(nèi)臟中富含蛋白質(zhì)、長鏈多不飽和脂肪酸及多種有益化學(xué)元素,具有較高的營養(yǎng)價值及良好的開發(fā)利用前號。目前,單環(huán)刺蜢多以鮮銷為主,內(nèi)臟通常被丟棄,造成資源的極大浪費。因此,本文以單環(huán)刺蛙
3、內(nèi)臟為原料,探索蛋白酶的提取條件,并對從中提取的蛋白酶進(jìn)行分離純化,探索其酶學(xué)性質(zhì)與酶切規(guī)律,以期為蛋白酶的深層次利用與開發(fā),提供理論基礎(chǔ)與新思路:同時,充分利用海洋資源,減少環(huán)境污染,彌補單環(huán)刺蜢在此方面的研究空白。主要結(jié)論如下:l本文以酶比活和酶活為指標(biāo),通過單因素試驗及響應(yīng)面試驗,優(yōu)化粗蛋白酶包括液固比、浸提時間、浸提溫度和pH值4個因素在內(nèi)的提取工藝條件,探索單環(huán)刺蜢內(nèi)臟提取粗蛋白酶的最佳提取條件。結(jié)果表明,單環(huán)刺蜢內(nèi)臟粗蛋白酶
4、提取的最優(yōu)工藝:液固比220:1、浸提時間30rain、溫度12℃、pH80,在此工藝條件下,單環(huán)刺蜢粗蛋白酶酶比活為339U/mg。2本章以單環(huán)刺蜢內(nèi)臟為原料,對提取的蛋白酶的分離純化條件及酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了研究。結(jié)果表明,對比三種方法的純化結(jié)果,初步純化條件選取硫酸銨純化:經(jīng)硫酸銨純化、SephadexG100凝膠過濾層析、DEAE52陰離子交換層析后得到單環(huán)刺蜢內(nèi)臟蛋白酶純品(蛋白酶LNP2):經(jīng)SDSPAGE電泳及HPLC顯示該酶為
5、電泳純與色譜純,分子量約為59KDa。蛋白酶UqP2最適作用溫度為50℃,最適pH范圍為6~8。絲氨酸蛋白酶抑制劑(PMSF)與金屬蛋白酶抑制劑(EDTA)對蛋白酶LNP2的酶活均表現(xiàn)出較強的抑制作用,初步推測該酶為絲氨酸蛋白酶,其活性中心可能含有金屬離子:13巰基乙醇([3ME)與二硫蘇糖醇(DTT)抑制作用不明顯。Ca2、zn2、Ba2均隨著濃度的增加對酶活的抑制作用增強,Zn2的抑制作用最明顯,F(xiàn)e2在低濃度下對該酶具有較明顯的激
6、活作用。因此,初步推測該酶活性中心可能含有Fe2。3本章以從單環(huán)刺蜢內(nèi)臟中分離純化的蛋白酶LNP2為研究對象,以具有內(nèi)切特性的中性蛋白酶為參比,以酶解液水解度、游離氨基酸與肽分子量分布為指標(biāo),確定蛋白酶U咿2的酶切規(guī)律。結(jié)果表明,三種酶解方式所得酶解液的水解度(DII),雙酶最大,中性蛋白酶次之,蛋白酶LNP2最低:蛋白酶LNP2與中性蛋白酶酶切位點數(shù)相似,酶切作用位點具有互補性:蛋白酶LNP2可以更多地將豆粕底物水解為短肽或小肽。綜合
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 單環(huán)刺螠纖溶酶的分離純化及單環(huán)刺螠纖溶酶Ⅲ的藥效學(xué)研究.pdf
- 單環(huán)刺螠纖溶酶UFEⅠ的分離純化和性質(zhì)研究.pdf
- 單環(huán)刺螠纖溶酶的分離純化及其藥效學(xué)研究.pdf
- 單環(huán)刺螠糖胺聚糖的分離純化與生物學(xué)功能研究.pdf
- 單環(huán)刺螠纖溶酶分離純化、免疫原性及其基因克隆的初步研究.pdf
- 849.南極磷蝦胰蛋白酶的分離純化及酶學(xué)性質(zhì)研究
- 太平洋磷蝦胰蛋白酶樣酶的分離純化及其酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf
- 枯草桿菌蛋白酶的分離純化、酶學(xué)性質(zhì)及體外溶栓性質(zhì).pdf
- 金黃桿菌來源的角蛋白酶的分離純化和酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf
- 黃鱔蛋白酶分離純化、性質(zhì)與應(yīng)用研究.pdf
- 日本鰻鱺胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶的分離純化及性質(zhì)分析.pdf
- 單環(huán)刺螠(Urechis unicinctus)多糖的分離純化和結(jié)構(gòu)研究.pdf
- 單環(huán)刺螠體壁膠原蛋白結(jié)構(gòu)和性質(zhì)的研究.pdf
- 單環(huán)刺螠纖溶酶UFEⅠ的酶學(xué)性質(zhì)和初步藥效學(xué)及安全性評價.pdf
- 羅漢果蛋白酶的分離純化及性質(zhì)研究.pdf
- 蠟蚧菌蛋白酶的純化及酶學(xué)性質(zhì)初步研究.pdf
- 單環(huán)刺螠纖溶酶的重組表達(dá)及活性研究.pdf
- 堿性蛋白酶的發(fā)酵與酶學(xué)性質(zhì)的研究.pdf
- 鯽魚肝胰臟中胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的分離純化及性質(zhì)研究.pdf
- 枯草芽孢桿菌彈性蛋白酶的純化及酶學(xué)性質(zhì)的研究.pdf
評論
0/150
提交評論