細(xì)胞因子對(duì)牛體外受精胚胎細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、本研究通過在牛卵母細(xì)胞成熟液和胚胎發(fā)育液中添加不同濃度的表皮生長(zhǎng)因子（EGF）和半胱胺（CYS），比較其對(duì)牛卵母細(xì)胞成熟和胚胎發(fā)育的影響，利用TUNEL檢測(cè)法，檢測(cè)了不同處理?xiàng)l件下胚胎細(xì)胞的凋亡情況。為牛卵母細(xì)胞和胚胎體外發(fā)育的提高提供理論基礎(chǔ)。研究結(jié)果如下：
　　試驗(yàn)一，研究了牛體外受精胚胎在不同發(fā)育階段的細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果表明，對(duì)于牛體外受精胚胎，凋亡信號(hào)最早出現(xiàn)于16細(xì)胞期，隨著胚胎的發(fā)育，凋亡發(fā)生比率也增加。16細(xì)胞凋亡率

2、為26％，桑葚胚凋亡率為83%，囊胚為97%,擴(kuò)展囊胚和孵化囊胚為100%。在囊胚階段，細(xì)胞凋亡指數(shù)也隨發(fā)育進(jìn)行呈現(xiàn)上升趨勢(shì)（囊胚凋亡指數(shù)為0.031，擴(kuò)展囊胚為0.066,孵化囊胚為0.105）。
　　試驗(yàn)二，比較不同濃度EGF或CYS對(duì)牛卵母細(xì)胞成熟的影響。結(jié)果表明50ng/ml EGF顯著提高卵母細(xì)胞的卵裂率。說明EGF對(duì)卵母細(xì)胞成熟有促進(jìn)作用。在成熟液中添加CYS對(duì)卵母細(xì)胞卵裂率和囊胚率沒有顯著影響，但50ng/ml濃度E

3、GF和100uM濃度CYS處理組的囊胚凋亡指數(shù)都顯著低于對(duì)照組(0.057,0.058 v.0.071)，說明成熟液添加適當(dāng)濃度EGF或CYS能夠顯著提高牛卵母細(xì)胞的質(zhì)量。
　　試驗(yàn)三，比較了在牛胚胎發(fā)育液中添加不同濃度EGF或CYS的效果。結(jié)果表明EGF對(duì)牛胚胎體外發(fā)育沒有明顯影響。在胚胎發(fā)育液中添加100uMCYS可以明顯提高胚胎發(fā)育能力，囊胚率顯著高于對(duì)照組（36.5 v.29.4,P<0.05），囊胚的凋亡指數(shù)顯著低于其他

4、組(0.058 v.0.069,0.070,0.071,0.073，P<0.05)。說明CYS對(duì)牛胚胎體外發(fā)育有明顯促進(jìn)作用。
　　試驗(yàn)四，比較了在牛卵母細(xì)胞成熟液和胚胎發(fā)育液中同時(shí)添加EGF或CYS的效果。結(jié)果表明，同時(shí)添加EGF或CYS對(duì)牛卵母細(xì)胞的成熟及胚胎的發(fā)育沒有產(chǎn)生疊加效應(yīng)。
　　以上結(jié)果表明，（1）牛體外受精胚胎，凋亡信號(hào)最早出現(xiàn)于16細(xì)胞期，隨著胚胎的發(fā)育，凋亡發(fā)生比率也增加。（2）EGF和CYS可以促進(jìn)卵母