自然痰與誘導(dǎo)痰涂片細胞分類計數(shù)比較

1、<p>　　自然痰與誘導(dǎo)痰涂片細胞分類計數(shù)比較</p><p>　　作者：魏為利, 呂寒靜, 楊忠民, 洪光朝, 劉瑞麟, 邱忠民 </p><p>　　【關(guān)鍵詞】 誘導(dǎo)痰 </p><p>　　【Abstract】 AIM: To investigate the cell viability between induced sputum and n

2、atural sputum smear. METHODS: A tenmonth randomized, doubleblinded and controlled trial was conducted in our Department of Respiratory Medicine. Between July 1, 2003 and April 5, 2004, the sputum smears with or without

3、14 mL of 4% saline inhaled via an ultrasonic nebulizer were harvested randomly at 4 to 5 hours interval and total 43 natural sputum smears and 56 induced sputum smears from 59 patients with respiratory</p><p&g

4、t;　　【Keywords】 induced sputum; Giemsa stain; cell counts </p><p>　　【摘要】 目的: 比較誘導(dǎo)痰與自然痰涂片細胞分類計數(shù)和留取成功率,為廣泛應(yīng)用誘導(dǎo)痰提供理論依據(jù). 方法: 呼吸道疾病患者59例間隔4~5 h隨機先后留取自然痰和0.068 mol/L氯化鈉（即4% NaCl）超聲霧化的誘導(dǎo)痰，成功地留取合格自然痰標本43份、誘導(dǎo)痰56份.

5、43位患者的誘導(dǎo)痰和相應(yīng)的自然痰涂片分為兩組，Giemsa染色后比較誘導(dǎo)痰和自然痰兩組每高倍鏡視野單核細胞、淋巴細胞、嗜中性粒細胞`嗜酸性粒細胞和粒細胞的絕對數(shù)，以及每種細胞占粒細胞的百分比. 結(jié)果: 誘導(dǎo)痰和自然痰的成功率分別為95%和73%,χ2=10.60, P＜0.01；粒細胞總數(shù)分別為120.25±28.16和101.00±23.65個／每高倍鏡視野，t=8.37,P＜0.01；單核細胞、淋巴細胞、嗜中

6、性粒細胞和嗜酸性粒細胞數(shù)分別為45.50±25.41和38.50±21.50, 31.25±8.24和27.25±7.19, 40.00±21.66和32.75±17.73, 3.50±1.53和2.50±1.09個／每高倍鏡視野 P＜0.05，然而，每種細胞占粒細胞的百分比分別為(37.8±21.</p><p>　　【關(guān)

7、鍵詞】 誘導(dǎo)痰;Giemsa染色;細胞計數(shù) </p><p><b>　　0引言 </b></p><p>　　對于不能深咳痰的患者，以氣溶膠誘導(dǎo)可以激發(fā)出強烈的咳嗽反射，由此產(chǎn)生的痰稱為誘導(dǎo)痰. 誘導(dǎo)痰的應(yīng)用不足50 a，誘導(dǎo)痰涂片Giemsa染色細胞分類計數(shù)用于呼吸道咳嗽變異性哮喘、嗜酸細胞性支氣管炎和感染性疾病的診斷. 目前這種方法多局限于科學研究，臨床上尚未廣

8、泛應(yīng)用. 我們總結(jié)了我院開展的誘導(dǎo)痰涂片Giemsa染色細胞分析技術(shù)，將誘導(dǎo)痰與自然痰相比較，證實了前者的優(yōu)越性. </p><p><b>　　1材料和方法 </b></p><p><b>　　1.1材料 </b></p><p>　　我院呼吸內(nèi)科自20030701/20040405對門診和住院患者（慢性支氣管炎、支氣

9、管哮喘、慢性支氣管炎合并哮喘和慢性咳嗽）59例開展留取痰液檢查，按下述方法間隔4~5 h隨機先后留取自然痰和誘導(dǎo)痰. 室溫下以無菌生理鹽水漱口3次，鼓勵咳出深部痰，留取第一口以后的痰作標本. 患者自行咳出的痰液稱為自然痰. 以1.71 mol/L NaCl (10% NaCl) 4 mL和0.15 mol/L NaCl (0.9% NaCl) 10 mL配制而成0.68 mol/L NaCl(4% NaCl)溶液，經(jīng)超聲霧化儀（NEU1

10、2; OMRON; ToKyo, Japan）霧化吸入，留取誘導(dǎo)痰. 鏡檢篩選合格標本(鱗狀上皮細胞&lt;10個/低倍視野、多核白細胞&gt;25個/低倍視野，或二者比例&lt;12.5)，成功的留取合格自然痰標本43份、誘導(dǎo)痰56份. </p><p><b>　　1.2方法 </b></p><p>　　13份誘導(dǎo)痰標本由于缺少對照樣本而

11、被剔除，將43份自然痰標本與對應(yīng)的誘導(dǎo)痰標本劃分為自然痰與誘導(dǎo)痰兩組. 涂片染色方法：每份標本均以鑷子取痰栓涂片6~8張（高倍顯微鏡下無細胞重疊且每視野細胞數(shù)大于50個為合格痰涂片），自然干燥后以甲醇固定，Giemsa原液(上海虹橋樂翔醫(yī)用試劑公司)與蒸餾水以2∶9配制成0.1818濃度的稀釋液，每張涂片以1 mL Giemsa稀釋液染色10 min，再以流水水平方向沖洗同樣時間，自然干燥后，兩次高倍鏡下重復(fù)計數(shù)不同涂片至少四個視野中4

12、00個有核細胞（上皮細胞除外），并分別計數(shù)單核細胞、淋巴細胞、中性粒細胞和嗜酸性粒細胞的絕對數(shù)，計算出每種細胞的百分比，以每高倍鏡視野為單位取均值作為記錄數(shù)據(jù). </p><p>　　統(tǒng)計學處理：計數(shù)資料作配對比較t檢驗，百分比作四格表資料的χ2檢驗. </p><p><b>　　2結(jié)果 </b></p><p>　　2.1誘導(dǎo)痰與自然痰留取

13、成功率在59例患者中，取得自然痰標本43份，誘導(dǎo)痰標本56份. 四格表資料的χ2檢驗，得出χ2=10.60, P＜0.01，留取誘導(dǎo)痰較自然痰成功率高（Fig 1）. </p><p>　　2.2誘導(dǎo)痰與自然痰涂片細胞分類計數(shù)兩組痰涂片進行配對比較t檢驗，每高倍顯微鏡中單核細胞、淋巴細胞、嗜中性粒細胞、嗜酸性粒細胞和總數(shù)增加（Tab 1）.表1誘導(dǎo)痰與自然痰涂片細胞分類計數(shù)比較（略） </p>&l

14、t;p>　　2.3誘導(dǎo)痰和自然痰痰涂片百分比誘導(dǎo)痰和自然痰涂片中單核細胞、淋巴細胞、嗜中性粒細胞、嗜酸性粒細胞所占百分比無差別（Tab 2）.表2誘導(dǎo)痰與自然痰涂片細胞分類計數(shù)百分比比較（略） </p><p><b>　　3討論 </b></p><p>　　高滲NaCl水霧化吸入誘導(dǎo)痰液的方法是Bickerman于1958年最早提出的，誘導(dǎo)痰脫落細胞病理檢查

15、的應(yīng)用，提高了肺部腫瘤的診斷率. 之后人們又發(fā)現(xiàn)誘導(dǎo)痰細菌涂片或培養(yǎng)可以提高肺結(jié)核［1］的診斷率，1986年高滲NaCl水吸入誘導(dǎo)痰方法成功地用于艾滋病患者肺炎的診斷［2］. 1992年P(guān)in等［3］首次將誘導(dǎo)痰液方法用于哮喘研究，并率先引入痰涂片細胞分類計數(shù)方法，擴大了痰液分析的應(yīng)用范圍. 近十余年來，去細胞誘導(dǎo)痰處理液中嗜酸細胞陽離子蛋白（ECP）、白介素、前列腺素和組胺的測定技術(shù)已經(jīng)用于哮喘的科學研究. 誘導(dǎo)痰的機制尚不十分清楚，

16、可能通過:①滲透鹽效應(yīng)增加水分進入氣道；②使黏液變稀，黏液層容易被纖毛帶走，從而增加黏膜清除率［4］；③促進黏膜腺體的分泌而促進氣道表面黏液的排出等機制而產(chǎn)生痰液. 文獻中用于誘導(dǎo)痰的NaCl水濃度自0.15~1.20 (0.9%~2%) mol/L不等［5］，從0.51 (3%) mol/L NaCl開始，在誘導(dǎo)過程中NaCl的濃度會逐漸增加至0.68 (4%) mol/L或0.85 (5%) mol/L［3，6］. </p&

17、gt;<p>　　本實驗我們對0.68 mol/L NaCl誘導(dǎo)痰方法進行研究，顯示誘導(dǎo)痰較自然痰留取的成功率顯著增高（Fig 1），盡管Bartoli等［7］是將高滲NaCl水和生理NaCl水誘導(dǎo)痰相比較，但是所得結(jié)論與本研究有一致之處. 另外，我們研究得出，與自然痰相比誘導(dǎo)痰中白細胞總數(shù)和其中的單核細胞、淋巴細胞、中性粒細胞和嗜酸性粒細胞于每高倍鏡視野的絕對計數(shù)顯著增加，而細胞分類計數(shù)無差別的結(jié)論；本實驗結(jié)果與誘導(dǎo)痰液

18、中的炎癥細胞含量較經(jīng)纖維支氣管鏡肺泡灌洗液高［8］的結(jié)論相似. 有報道高滲NaCl水吸入后誘導(dǎo)痰中，上皮細胞和肥大細胞釋放的ECP和組胺增加，而白三烯和前列腺素的含量無變化，這可能是由于前兩者以細胞內(nèi)儲存的形式存在，而后兩者則相反［9］. 此結(jié)論尚需進一步證實. 由于客觀條件的限制，本實驗未將痰液預(yù)處理后取細胞成分進行精確定量分析；然而本實驗過程由同一名不知試驗?zāi)康尼t(yī)師以鑷子捏取痰栓涂片6-8張?zhí)低科?，并且兩次重?fù)計數(shù)不同涂片的五個視野

19、中至少400個細胞，剔除每高倍鏡視野細胞過少和重疊堆積情況，取均值進行比較. 因此該痰涂片細胞分類計數(shù)方法雖然簡易，但是不影響所得結(jié)果的正確性，能夠滿足</p><p>　　呼吸道疾病的早期診斷、療效與預(yù)后評估是呼吸科醫(yī)務(wù)人員的工作目標，誘導(dǎo)痰具有無創(chuàng)、安全、高效、經(jīng)濟和結(jié)果客觀的優(yōu)點，因此已成為當前研究下呼吸道炎癥非創(chuàng)傷性檢測的熱點、科研與臨床工作必不可少的工具［10］，如誘導(dǎo)痰嗜酸細胞減少說明支氣管哮喘［11

20、］與慢性阻塞性肺?。?2］對激素治療反應(yīng)良好. 相信在不遠的將來，痰液細胞分類計數(shù)檢查亦將如血常規(guī)一樣在臨床中得以廣泛應(yīng)用. </p><p>　　致謝感謝血液實驗室顧榮泉主任、攝影師徐百強和病理科湯如勇主任的指導(dǎo)，感謝戴燕、鄭偉萍和王雪莉醫(yī)師的幫助. </p><p><b>　　【參考文獻】 </b></p><p>　?。?］ Conde

21、 MB, Soares SL, Mello FC, et al. Comparison of sputum induction with fiberoptic bronchoscopy in the diagnosis of tuberculosis: Experience at an acquired immune deficiency syndrome reference center in Rio de Janeiro, Braz

22、il ［J］. Am J Respir Crit Care Med，2000；162(6):2238-2240. </p><p>　　［2］ Pitchenik AE, Ganjei P, Torres A, et al. Sputum examination for the diagnosis of Pneumocystis carinii pneumonia in the acquired immunode

23、ficiency syndrome ［J］. Am Rev Respir Dis，1986；133(2):226-229. </p><p>　?。?］ Pin I, Gibson PG, Kolendowicz R, et al. Use of induced sputum cell counts to investigate airway inflammation in asthma ［J］. Thorax，

24、 1992；47(1):25-29. </p><p>　?。?］ 姚欣，殷凱生. 吸入4%高滲鹽水誘導(dǎo)痰液在哮喘中的應(yīng)用［J］. 南京醫(yī)科大學學報, 1999;19（3）：198-199. </p><p>　　Yao X, Yin KS. The application of 4% saline inhaled via an ultrasonic nebulizer on asthm

25、a［J］. Nanjing Med Univ J，1999;19（3）：198-199. </p><p>　?。?］ Pavia D, Thomson ML, Clarke SW. Enhanced clearance of secretions from the human lung after the administration of hypertonic saline aerosol ［J］. Am R

26、ev Respir Dis, 1978;117(2):199-203. </p><p>　?。?］ Bacci E, Cianchetti S, Ruocco L, et al. Comparison between eosinophilic markers in induced sputum and blood in asthmatic patients ［J］. Clin Exp Allergy, 1998

27、;28(10):1237-1243. </p><p>　?。?］ Bartoli ML, Bacci E, Carnevali S, et al. Quality evaluation of samples obtained by spontaneous or induced sputum: comparison between two methods of processing and relationshi

28、p with clinical and functional findings ［J］. J Asthma, 2002;39(6):479-486. </p><p>　?。?］ Grootendorst DC, Sont JK, Willems LN, et al. Comparison of inflammatory cell counts in asthma: induced sputum vs bronc

29、hoalveolar lavage and bronchial biopsies ［J］. Clin Exp Allergy, 1997;27(7):769-779. </p><p>　?。?］ Brightling CE, Ward R, Woltmann G, et al. Induced sputum inflammatory mediator concentrations in eosinophili

30、c bronchitis and asthma［J］. Am J Respir Crit Care Med, 2000;162(3):878-882. </p><p>　?。?0］ Djukanovic R, Sterk PJ, Fahy JV, et al. Standardised methodology of sputum induction and processing ［J］. Eur Respir

31、J, 2002;37(Suppl):1-2. </p><p>　?。?1］ Pavord ID, Sterk PJ, Hargreave FE, et al. Clinical applications of assessment of airway inflammation using induced sputum ［J］. Eur Respir J, 2002;37(Suppl):40-43. </p

32、><p>　?。?2］ Pizzichini E, Pizzichini MM, Gibson P, et al. Sputum eosinophilia predicts benefit from prednisone in smokers with chronic obstructive bronchitis ［J］. Am J Respir Crit Care Med, 1998;158(5):1511-151