牛源結(jié)核分支桿菌(寧夏分離株)rpsL、rpoB、katG基因突變分析.pdf

1、目的：在對(duì)臨床分離的奶牛結(jié)核分支桿菌進(jìn)行藥敏分析的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步應(yīng)用分子生物學(xué)手段檢測(cè)耐藥基因，在分子水平上探討奶牛結(jié)核分支桿菌分子耐藥機(jī)制的發(fā)生、發(fā)展及其變異規(guī)律。
　　 方法：利用建立的噬菌體生物擴(kuò)增法對(duì)寧夏地區(qū)奶牛結(jié)核分支桿菌臨床分離株、誘導(dǎo)菌株的耐藥性進(jìn)行表型檢測(cè)；應(yīng)用分子生物學(xué)方法對(duì)耐藥基因進(jìn)行序列分析，確認(rèn)本地區(qū)奶牛結(jié)核分支桿菌耐藥性及多重耐藥性的產(chǎn)生情況與rpsL基因、rpoB基因、katG基因的關(guān)系，并與人源結(jié)核

2、分支桿菌分子耐藥性進(jìn)行對(duì)比分析；采用人工誘導(dǎo)法誘導(dǎo)牛結(jié)核分支桿菌標(biāo)準(zhǔn)株對(duì)鏈霉素產(chǎn)生耐藥性，應(yīng)剛PCR-DS方法對(duì)誘導(dǎo)耐約菌株的基因突變進(jìn)行檢測(cè)。
　　 結(jié)果；建立并優(yōu)化了奶牛結(jié)核分支桿菌耐藥性表型檢測(cè)方法—噬菌體生物擴(kuò)增法；應(yīng)用該方法對(duì)奶牛結(jié)核分支桿菌臨床分離株進(jìn)行耐藥性檢測(cè)，并與絕對(duì)濃度法檢測(cè)結(jié)果對(duì)比，從25株臨床分離株中篩選出14株耐約菌株，其中12株為單耐鏈霉素、利福平、異煙肼菌株，2株為同時(shí)耐利福平和異煙肼的多重耐約株；

3、采剛PCR-DS方法對(duì)25株臨床分離株進(jìn)行測(cè)序分析，12株單耐藥分離株在rpsL，rpoB、katG基因上發(fā)生了堿基突變，其中5株耐鏈霉素菌株的rpsL基因在43位點(diǎn)發(fā)生堿基突變。5株耐利福平菌株的rpoB基因在531位點(diǎn)、526位點(diǎn)、511位點(diǎn)發(fā)生堿基定點(diǎn)突變。2株耐異煙肼菌株，其中1株在katG基因315位點(diǎn)發(fā)生堿基突變，1株在463位點(diǎn)發(fā)生堿基突變。2株多重耐藥株的rpoB基因和katG基因同時(shí)發(fā)生了堿基突變，突變位點(diǎn)為rpoB基