分子生物學(xué)教學(xué)大綱

1、《分子生物學(xué)實驗》教學(xué)大綱一、課程基本信息課程編碼：091118B課程名稱：分子生物學(xué)實驗英文名稱：experimentofmolecularbiology課程類別：專業(yè)必修課總學(xué)時：24總學(xué)分：1適用專業(yè)：生物科學(xué)二、實驗課程的性質(zhì)、目標(biāo)與任務(wù)1.分子生物學(xué)已成為生命科學(xué)的基礎(chǔ)學(xué)科之一，其基本理論和實驗技術(shù)已滲透到生物學(xué)的各個領(lǐng)域并促進(jìn)了一批新學(xué)科的興起和發(fā)展。目前，以分子生物學(xué)為基礎(chǔ)的基因克隆重組技術(shù)已成為現(xiàn)代生物技術(shù)的核心。因此，

2、在掌握基本分子生物學(xué)理論的基礎(chǔ)上，為培養(yǎng)學(xué)生在分子生物學(xué)技術(shù)方面的實際動手能力，開設(shè)本實驗課程。2.目標(biāo)：通過實驗原理的講解和實驗操作，使學(xué)生初步了解和熟悉現(xiàn)代分子生物學(xué)實驗的基本原理、操作技能和實際應(yīng)用，提高學(xué)生的創(chuàng)新思維和獨(dú)立分析問題、解決問題的能力。3.通過本課程的實驗教學(xué)和實驗操作，要求學(xué)生熟練掌握下列分子生物學(xué)實驗技術(shù)：大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備和轉(zhuǎn)化，質(zhì)粒DNA的分離及純化，瓊脂糖凝膠電泳，PCR擴(kuò)增，DNA重組、轉(zhuǎn)化與檢測實

3、驗等。三、實驗課程教學(xué)基本要求（1）注重分子生物學(xué)基礎(chǔ)實驗技能的掌握與提高，提升學(xué)生的動手操作能力；（2）實驗課前要預(yù)習(xí)，明確每次實驗的目的、原理與基本步驟；（3）實驗過程中要具有嚴(yán)謹(jǐn)科學(xué)的態(tài)度，尊重事實與實驗結(jié)果，要善于發(fā)現(xiàn)問題、分析問題、解決問題；（4）樹立學(xué)生之間的交流與合作意識。四、實驗教學(xué)內(nèi)容及要求實驗一大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備5.涂平板6.菌落培養(yǎng)【所需主要儀器設(shè)備】1.超凈工作臺2.恒溫水浴3.恒溫?fù)u床實驗三質(zhì)粒DNA的提

4、取【實驗類型】基礎(chǔ)性實驗【目的與要求】堿裂解法提取質(zhì)粒的技術(shù)和方法。注意加入三種溶液的先后順序，在提取過程中，動作要輕柔?！緝?nèi)容提要】堿裂解法提取質(zhì)粒利用的是環(huán)狀質(zhì)粒DNA與線狀的染色體DNA片段在拓?fù)鋵W(xué)上的差異來分離它們。在pH值介于12.012.5這個狹窄的范圍內(nèi)，線狀的DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)解開變性，在這樣的條件下，共價閉環(huán)質(zhì)粒DNA的氫鍵雖然斷裂，但兩條互補(bǔ)鏈彼此依然相互盤繞而緊密地結(jié)合在一起。當(dāng)加入pH4.8的醋酸鉀高鹽緩沖液使pH

5、降低至中性后，共價閉合環(huán)狀的質(zhì)粒DNA的兩條互補(bǔ)鏈迅速而準(zhǔn)確地復(fù)性，而線狀的染色體DNA的兩條互補(bǔ)鏈彼此已完全分開，不能迅速而準(zhǔn)確地復(fù)性，它們纏繞形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)SDS復(fù)合物等一起沉淀下來，而質(zhì)粒DNA卻留在上清液中。實驗操作步驟：1.收集菌體2.加入三種溶液3.離心4.質(zhì)粒的純化5.質(zhì)粒的保存【所需主要儀器設(shè)備】1恒溫培養(yǎng)箱2恒溫?fù)u床3小型高速離心機(jī)4漩渦混合器實驗四瓊脂糖凝膠電泳檢測