甲流乙流病毒檢測進(jìn)展

1、甲流乙流病毒檢驗(yàn)進(jìn)展,陜西省中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科王荔敏,流感的分型,流感病毒屬于RNA病毒。流行性感冒是由甲（A)、乙（B）、丙（C）三型流感病毒引起，A型流感病毒常以流行形勢出現(xiàn)，能引起世界性流感大流行，它在動物中廣泛分布，并也能在動物中引起流感流行和造成大量動物死亡；B型流感病毒常常引起局部暴發(fā)，不引起世界性流感大流行；C型流感病毒主要以散在形式出現(xiàn)，主要侵襲嬰幼兒，一般不引起流行。目前感染人的主要是甲型流感病毒中的H1N1、H

2、3N2亞型及乙型流感病毒中的Victoria和Yamagata系。,流感的實(shí)驗(yàn)室檢查,外周血常規(guī)：白細(xì)胞總數(shù)一般不高或者降低，重癥病例淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯降低血生化：部分病例出現(xiàn)低鉀血癥，少數(shù)病例肌酸激酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、乳酸脫氫酶、肌酐等升高。,病原學(xué)相關(guān)檢查,（1）病毒核酸檢測：以RT-PCR（最好采用real-time RT-PCR）法檢測呼吸道標(biāo)本（咽拭子、鼻拭子、鼻咽或氣管抽取物、痰）中的流感病毒核酸。

3、病毒核酸檢測的特異性和敏感性最好，且能區(qū)分病毒類型和亞型（2）病毒抗原檢測（快速診斷試劑檢測）：快速抗原檢測方法可采用膠體金和免疫熒光法。由于快速抗原檢測的敏感性低于核酸檢測，因此對快速抗原檢測結(jié)果的解釋應(yīng)結(jié)合患者流行病史和臨床癥狀綜合考慮（3）血清學(xué)檢測：檢測流感病毒特異性IgM和IgG抗體水平。動態(tài)檢測的IgG抗體水平恢復(fù)期比急性期有4倍或以上升高有回顧性診斷意義（4）病毒的分離培養(yǎng)和鑒定：屬于金標(biāo)準(zhǔn)，在流感流行季節(jié)，流感樣病

4、例快速抗原診斷和免疫熒光法檢測陰性的患者建議再做病毒分離,病毒抗原檢測（快速診斷試劑檢測）血清學(xué)檢測 （呼吸道病毒檢測）,目前我院檢驗(yàn)科流感病毒開展的項(xiàng)目,病毒抗原檢測流程,1. 大夫留取標(biāo)本，立即送檢；2. 檢驗(yàn)科工作人員接收標(biāo)本；3． 檢驗(yàn)科人員接收標(biāo)本半個小時后在檢驗(yàn)科門診四樓窗口打化驗(yàn)單；,病毒抗原檢測的標(biāo)本采集,咽喉拭子（推薦）：用滅菌過的棉簽從口腔完全插入咽喉中，以咽后壁、上鄂、扁桃體發(fā)紅

5、 部位為中心，摩擦數(shù)次，采集粘膜表皮鼻腔拭子：用滅菌過的棉簽完全插入鼻腔中，摩擦鼻甲數(shù)次，采集粘膜表皮。鼻腔抽洗液：抽吸器的一側(cè)的管子連接在抽吸泵上，另一側(cè)的管子從外鼻孔完全插入鼻腔，啟動抽吸泵采集鼻腔液在抽吸器中。將棉簽浸入到鼻腔抽洗液，使標(biāo)本沾到棉簽上。注意：應(yīng)使用泡沫或人造絲材質(zhì)的棉簽采集樣本!樣本采集后應(yīng)盡快送檢，如果不能及時送檢，應(yīng)室溫儲存在密閉容器中，但不可超過24小時，樣本處理和儲運(yùn)不合適，可能會造成假陰性。

6、采集用的棉簽到檢驗(yàn)科塔樓二樓領(lǐng)取。,病毒抗原檢測內(nèi)容,普通甲流抗原（H1N1及其亞型，H3N2及其亞型，H5N1及其亞型，H9N2及其亞型，H7N3及其亞型乙型流感抗原（Brigit, B/R5 HongKong/5/72 Russia/69 Lee/40）,病毒抗原檢測的方法和原理,方法：Flu檢測試劑運(yùn)用膠體金標(biāo)記和免疫層析技術(shù)，檢測臨床樣本中的Flu抗原并以可視信號的方式直接顯示結(jié)果。原理：加入充分裂解的臨床樣本

7、后，F(xiàn)lu抗原在試劑條的前段與膠體金標(biāo)記的Flu抗體結(jié)合，形成抗原-抗體復(fù)合物，該復(fù)合物在試劑膜上層析流動，經(jīng)Flu單克隆抗體條帶（FluA或FluB測試線）時再次結(jié)合Flu單克隆抗體，形成雙抗體夾心，并顯示紫紅色條帶。,病毒抗原檢測結(jié)果的解讀,陽性 樣本中含有Flu抗原,陰性 樣本中不含F(xiàn)lu抗原，或者含量低于本產(chǎn)品的檢測水平建議對陰性結(jié)果的樣本進(jìn)行微生物培養(yǎng)以確定是否感染流感，若培養(yǎng)結(jié)果與檢測結(jié)果不同，應(yīng)再次取樣進(jìn)

8、行微生物培養(yǎng)復(fù)查,病毒抗原檢測方法的局限性,,,可快速檢測甲型和乙型流感病毒，診斷應(yīng)結(jié)合臨床癥狀、病毒分離培養(yǎng)等其他檢查結(jié)果，由醫(yī)生綜合判斷進(jìn)行確診Flu病毒已失活的情況下樣本中仍可能有Flu抗原Flu檢測試劑結(jié)果為陰性并不排除患者Flu感染的可能性，取樣不充分或操作方法不當(dāng)，以及樣本中抗原水平低于檢測限均會導(dǎo)致假陰性Flu檢測試劑所使用的單克隆抗體可能無法檢測出所有的Flu抗原變異體或者是Flu新的菌株,呼吸道病毒（血清學(xué)

9、）檢測,檢測標(biāo)本：血清檢測內(nèi)容：抗甲型流感病毒抗體IgM(不分型，歐蒙公司專利) 抗乙型流感病毒抗體IgM(不分型，歐蒙公司專利)檢測方法：間接免疫熒光法,呼吸道病毒檢測的方法局限性,1.檢測結(jié)果必須結(jié)合患者的臨床癥狀進(jìn)行綜合診斷2. 感染初期，病原體特異性IgM抗體未產(chǎn)生或者滴度很低會導(dǎo)致陰性結(jié)果，如有懷疑病原體感染，應(yīng)提示患者在7-14天內(nèi)抽取第二份樣本復(fù)查3. 二次感染和復(fù)

10、發(fā)感染時也可能檢測到特異性IgM抗體4．免疫功能受損或接受免疫抑制治療的患者，其血清學(xué)IgM抗體檢測的參考價值有限5. 近幾個月內(nèi)接受過輸血或其他血液制品治療的人群，對其陽性檢測結(jié)果的分析應(yīng)慎重6. 不能區(qū)分流感病毒反復(fù)感染病例7．當(dāng)檢測流感病毒時，若包被毒株和患者感染毒株之間的差異太大，可能存在漏檢8. 接種流感疫苗也會產(chǎn)生IgM抗體，抗流感病毒抗體的解釋應(yīng)考慮疫苗接種史,臨床病例分析,醫(yī)囑名稱 流感病

11、毒檢測 收費(fèi)代碼 020916 收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn) 116/次 醫(yī)囑名稱 呼吸道病毒檢測收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn) 274/次取報告時間 每周三下午三點(diǎn)出結(jié)果,流行性出血熱病毒抗體檢測,檢測內(nèi)容：本實(shí)驗(yàn)主要定性檢測人血清或血漿標(biāo)本中漢坦病毒IgG和IgM抗體。標(biāo)本采集：采靜脈血

12、，避免溶血，采集后的標(biāo)本及時送檢，若不能及時送檢，可在2~8℃保存3天，長期保存需分裝血清冷凍于-20 ℃，忌反復(fù)凍融。檢測方法：本實(shí)驗(yàn)采用膠體金免疫層析技術(shù)，僅限于定性檢測樣本中的漢坦病毒抗體。,臨床意義：腎綜合征出血熱（HFRS）亦稱流行性出血熱。是由漢坦病毒引起的急性、地方性、自然疫源性傳染病，病情危急，并發(fā)癥多，病死率高。醫(yī)囑名稱：流行性出血熱病毒抗體測定收費(fèi)代碼：020919收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：48元/次報告時