化妝品微生物檢驗方法

1、一、一、總則1.范圍范圍本規(guī)范規(guī)定了化妝品微生物檢驗的基本要求。本規(guī)范適用于化妝品樣品的采集、保存及供檢樣品制備。2.儀器和設(shè)備儀器和設(shè)備2.1天平。2.2高壓滅菌器。2.3振蕩器。2.4三角瓶，250mL。2.5玻璃珠。2.6琉璃棒。2.7刻度吸管，1mL、10mL。2.8研缽或均質(zhì)器。2.9恒溫水浴箱。3.培養(yǎng)基和試劑培養(yǎng)基和試劑3.1生理鹽水成分：氯化鈉8.5g蒸餾水加至1000mL溶解后，分裝到加玻璃珠的三角瓶內(nèi)，每瓶90mL，

2、103.43kPa(121℃15lb)20min高壓滅菌。3.2SCDLP液體培養(yǎng)基成分：酪蛋白胨17g大豆蛋白胨3g氯化鈉5g磷酸氫二鉀2.5g葡萄糖1g吐溫807g蒸餾水1000mL制法：先將卵磷脂在少量蒸餾水中加溫溶解后，再與其它成分混合，加熱溶解，調(diào)pH為7.2～7.3分裝，103.43kPa(121℃15lb)20min高壓滅菌。注意振蕩，使沉淀于底層的吐溫80充分混合，冷卻至25℃左右使用。注：如無酪蛋白胨和大豆蛋白胨，也可

3、用多胨代替。3.3滅菌液體石蠟。3.4滅菌吐溫80。4.4.樣品的采集及注意事項樣品的采集及注意事項4.1所采集的樣品，應(yīng)具有代表性，一般視每批化妝品數(shù)量大小，隨機(jī)抽取相應(yīng)數(shù)量的包裝單位。檢驗時，應(yīng)分別從兩個包裝單位以上的樣品中共取10g或10mL。包裝量小于20g的樣品，采樣量可適當(dāng)增加樣品包裝數(shù)量。4.2供檢驗樣品，應(yīng)嚴(yán)格保持原有的包裝狀態(tài)。容器不應(yīng)有破裂，在檢驗前不得打開，防止樣品被污染。4.3接到樣品后，應(yīng)立即登記，編寫檢驗序號

4、，并按檢驗要求盡快檢驗。如不能及時檢驗，樣品應(yīng)放在室溫陰涼干燥處，不要冷藏或冷凍。4.4若只有一個樣品而同時需做多種分析，如細(xì)菌、毒理、化學(xué)等，則宜先取出部分樣品做細(xì)菌檢驗，再將剩4.2卵磷脂、吐溫80營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基4.2.1成分：蛋白胨20g牛肉膏3g氯化鈉5g瓊脂15g卵磷脂1g吐溫807g蒸餾水1000mL4.2.2制法：先將卵磷脂加到少量蒸餾水中，加熱溶解，加入吐溫80將其他成分（除瓊脂外）加到其余的蒸餾水中，溶解。加入已溶解的

5、卵磷脂、吐溫80混勻，調(diào)pH值為7.1～7.4加入瓊脂，103.43kPa(121℃15lb)20min高壓滅菌，儲存于冷暗處備用。4.30.5%氯化三苯四氮唑（235triphenylterazoliumchlideTTC）成分：TTC0.5g蒸餾水1000mL溶解后過濾，103.43kPa(121℃15lb)20min高壓滅菌，裝于棕色試劑瓶，置4℃冰箱備用。5.5.操作步驟操作步驟5.1用滅菌吸管吸取1：10稀釋的檢液2mL分別注

6、入到兩個滅菌平皿內(nèi)，每皿1mL。另取1mL注入到9mL滅菌生理鹽水試管中（注意勿使吸管接觸液面），更換一支吸管，并充分混勻，制成1：100檢液。吸取2mL，分別注入到兩個滅菌平皿內(nèi)，每皿1mL。如樣品含菌量高，還可再稀釋成1：10001：10000，……等，每種稀釋度應(yīng)更換1支吸管。5.2將融化并冷至45℃～50℃的卵磷脂吐溫80營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾注到平皿內(nèi)，每皿約15mL隨即轉(zhuǎn)動平皿，使樣品與培養(yǎng)基充分混合均勻，待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，

7、置36℃1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h2h。另取一個不加樣品的滅菌空平皿，加入約15mL卵磷脂吐溫80營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，置36℃1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h2h，為空白對照。5.3為便于區(qū)別化妝品中的顆粒與菌落，可在每100mL卵磷脂吐溫80營養(yǎng)瓊脂中加入1mL0.5%的TTC溶液，如有細(xì)菌存在，培養(yǎng)后菌落呈紅色，而化妝品的顆粒顏色無變化。6菌落計數(shù)方法菌落計數(shù)方法先用肉眼觀察，點數(shù)菌落數(shù)，然后再用放大5倍～10倍的放大鏡檢查，

8、以防遺漏。記下各平皿的菌落數(shù)后，求出同一個稀釋度各平皿生長的平均菌落數(shù)。若平皿中有連成片狀的菌落或花點樣菌落蔓延生長時，該平皿不宜計數(shù)。若片狀菌落不到平皿中的一半，而其余一半中菌落數(shù)分布又很均勻，則可將此半個平皿菌落計數(shù)后乘以2以代表全皿菌落數(shù)。7.7.菌落計數(shù)及報告方法菌落計數(shù)及報告方法7.1首先選取平均菌落數(shù)在30個～300個之間的平皿，作為菌落總數(shù)測定的范圍。當(dāng)只有一個稀釋度的平均菌落數(shù)符合此范圍時，即以該平皿菌落數(shù)乘其稀釋倍數(shù)（

9、見表1中例1）。7.2若有兩個稀釋度，其平均菌落數(shù)均在30個～300個之間，則應(yīng)求出兩菌落總數(shù)之比值來決定，若其比值小于或等于2應(yīng)報告其平均數(shù)，若大于2則報告其中稀釋度較低的平皿的菌落數(shù)（見表1中例2及例3）。7.3若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300個，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之（見表1中例4）。7.4若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30個，剛應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之（見表1中例5）。7.5若所有